蛋白质等电点的应用--厦门大学课件.pptVIP

蛋白质等电点的应用 化学系化学专业2班 罗佳蛋白质等电点的应用 等电点 等电点时蛋白质的特殊性质 主要应用 等电点沉淀与分离 电泳分离 等电聚焦电泳 目前研究应用情况 等电点的测定 等电点 以氨基乙酸为例,离解平衡为: 氨基乙酸 Ka1 双极离子 Ka2 氨基乙酸 阳离子 pI=1/2(pKa1+pKa2) 阴离子 当氨基酸的各种带电离子所带正电荷数与负电荷数相等时,此时溶液的pH就是这种氨基酸的等电点(pI). 蛋白质是由氨基酸组成的,除了有末端-NH3+和末端-COO-外,参与其组成的氨基酸残基侧链上还有酸、碱性基团,因此蛋白质是两性物质,也有等电点. 等电点的测定 从理论上讲,一种蛋白质只有一个等电点 ,但等电点测定结果受实验方法和条件 (溶剂性质、离子强度等)影响较大， 一种蛋白质也可能具有多个等电点。 在《抗HBsAg 单链抗体的等电点测定和结构模拟》这篇文章中,作者指出：“很多学者发现,经过各种色谱均证实为纯品的重组蛋白在等电聚焦时表现为多条带,这种现象的出现可能与蛋白质空间构象的差异有关.” 影响蛋白质等电点的因素有很多 谢 谢！ * * 阴 极 阳 极 pH=pI pHpI pHpI 带正电荷 带负电荷 净电荷为零 导电率 溶解度 渗透压 粘度 达到最低 等电点时蛋白质的特殊性质 原因:在等电点时，蛋白质分子以双极离子存在，总净电荷为零,颗粒无电荷间的排斥作用,易凝集成大颗粒，因而最不稳定，溶解度最小，易沉淀析出。 电泳分离 沉淀分离 …… pH=pI 溶解度最小 等电点沉淀与分离 大部或全部沉淀下来 pHpI或 pHpI 仍留在溶液中 蛋白质的分离 沉淀出来的蛋白质可保持天然构象，能再溶解于水并具有生物活性。 等电聚焦电泳 加 酸 加 碱 pI 小 大 pH 高 低 关键是形成pH梯度 熊盛，王一飞，钱垂文，罗勇，陈文吟，饶桂荣，粟宽源，余宙耀，抗HBsAg 单链抗体的等电点测定和结构模拟，华南理工大学学报( 自然科学版)，第31 卷第11 期，73-76，2003.11 *