miRNA和癌症 经典总结.pptVIP

microRNA 与 肿 瘤 姓名：赵东晓 学号： 导师：王伟 1. microRNA概述 2. microRNA的生成和作用机制 3. microRNA与癌症 4. microRNA研究的一般技术路线 miRNA是一种小分子，是平均长度约为21～22 个核苷酸的非编码单链RNA, 通过和靶基因mRNA 碱基配对引导沉默复合体 (RISC) 降解mRNA 或阻遏其翻译, 从而对基因进行转录后表达的调控 。 miRNA概述 microRNA基因组分布 ? 60%独立表达 ? 15% 成簇表达 ? 25%的miRNAs位于内含子 的生成 miRNA 1. 在细胞核内由基因组转录成前体转录本pri-miRNA； 2. pri-miRNA被RNaseⅢ核酸酶Drosha加工成约70-90nt的发夹状pre-miRNA; 3. Pre-miRNA在Exportin5介导作用下转运出胞核至胞质中,并被核酸酶Dicer加工成成熟的miRNA; 4.双链miRNA分子被解链，单链的miRNA与沉默复合体 (RISC)结合，形成RISC-miRNA 复合物; 5.通过与靶基因的3‘UTR区互补配对，对靶基因mRNA 进行切割或者翻译抑制。 Dicer microRNA成熟过程 Garzon, R，MicroRNA expression and function in cancer. Trends in Molecular Medicine 12, 580-587 (2006). 的作用机制 miRNA 19-23nt的成熟miRNA形成后与其他蛋白共同组成RNA介导的沉默复合体（RISC）参与RNA干扰途径；miRNA形成RISC复合体后可与特定的靶mRNA结合，这种结合不要求严格的互补配对。结合后导致靶mRNA翻译的抑制。 miRNA的生成和作用机制据体内外实验研究表明，miRNA的生成至少需要两个步骤:a) 在细胞核内，由长的内源性转录本(pri-miRNA)生成70nt的具有茎环结构的miRNA前体(pre-miRNA);b) 在细胞质内，在Dicer作用下将pre-miRNA加工为成熟的miRNA。 miRNA的作用机制－－至少有2种作用机制 1）与靶mRNA的3′端非翻译区（UTR ）结合，介导翻译调控－－miRNA与靶mRNA的3′-UTR区是一种非完全互补结合，并导致靶mRNA降解或转录后翻译抑制,从而调控靶基因的表达，但并不影响靶mRNA的稳定性 2）与靶mRNA的翻译区结合，直接引起切割－－类似RNAiHutvagner等(2002)对miRNA let-7的研究,发现了一个规律： miRNAs与mRNAs结合的互补程度决定了miRNAs将以何种机制发生作用，即完全互补引起RNAi，不完全互补则导致翻译抑制（图3）。 * miRNA 与靶 mRNA完全互补 miRNA 与靶 mRNA不完全互补 对靶mRNA的剪切 对靶mRNA翻译的阻遏 若miRNA表达异常呢 成熟的miRNA与靶mRNA结合后调节基因表达方式 靶mRNA降解 * 子宫颈 膀胱 乳房 肺癌 白血病 甲状腺 前列腺 胰腺 结肠 miRNA 的异常表达 上调，则其为致癌基因 下调，则其为抑癌基因 抑制了抑癌基因的活性 原癌基因的活性增加 miRNA与癌症 miRNA是如何致癌的？miRNA物理缺失以及后天沉默会增加蛋白质的表达和致癌潜能。影响成熟miRNA序列的微小突变能够破坏蛋白质表达的平衡。 miRNA作为癌基因在癌症中过表达的miRNA可作为癌基因。 miRNA作为抑癌基因在肿瘤形成中，一些 miRNAs 的表达在癌细胞中是降低的， 这一类的 miRNAs 被认为是肿瘤抑制基因。肿瘤抑制 miRNAs 通常通过负向调节癌基因和控制细胞分化或凋亡基因阻止肿瘤发生 。 miRNA作为进行性肿瘤和转移性肿瘤的调节者通过影响细胞迁徙和细胞的侵袭力 microRNA与肿瘤研究 1）肿瘤发生：MiRNA能够作为肿瘤抑制剂或致癌因子行使功能，特定 miRNA的敲除或过表达可用于研究miRNA在癌症发生和发展过程中的 作用 2）肿瘤诊断：正常组织和肿瘤组织中miRNA 表达明显改变. 这些特点 使miRNA 有可能成为肿瘤诊断的新的生物学标记和治疗药物作用的 靶标 3）肿瘤治疗：由于大多数致癌基因能够引发癌症，因而可以设计一些 人造miRNA阻碍其表达．从而达到抑制癌症形成的目的。 miRNA研究的技术路线 miRNA的 分离纯化 miRNA的 检测与鉴定 miRNA功能 研究 ? 克隆测序法 ? Northern杂交 ? RT-PCR技术 ? 生物信息学 ? 基因芯片技术 ? 原位杂交技术 ? 荧光定量技术 ? 定点突变 ? 异位