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第二节 微生物的生长规律 一、微生物的个体生长和同步生长 二、单细胞微生物的群体生长曲线 三、微生物的连续培养 微生物细胞极其微小，其个体生长表现为细胞体积的增加和细胞内物质含量的增加两个方面（病毒例外）, 细胞有一个从小到大的生长过程。 研究微生物单个细胞的生长变化是很困难的，主要的方法： 1.电子显微镜观察 2.同步培养技术 一、微生物的个体生长和同步生长 同步培养 使培养物中所有微生物细胞都处于相同的生长阶段的培养方法。通过分析此群体在各阶段的生物化学特性变化，间接了解单个细胞的相应变化规律性。 同步生长 培养物中所有微生物细胞都处于同一生长阶段，并都能同时分裂的生长方式。 同步培养方法 诱导法：采取控制培养温度、培养基成分和某些代谢抑制剂等，诱导形成同步生长的过程。 筛选法：将处于不同生长阶段的细胞，通过差异离心技术或滤膜过滤技术使它们分开，再行培养。 绝大多数微生物个体微小，个体质量和体积的变化不易观察，所以常是以微生物的群体作为研究对象，以微生物群体细胞的数量或群体细胞物质量的增加作为生长的指标。 二、单细胞微生物的群体生长曲线 在纯培养条件下，微生物的群体生长随着时间的增加，表现出明显的规律性，即开始缓慢，逐渐加快，达到最高阶段后，又逐渐下降，呈现一个曲线式的生长过程。 单细胞微生物的群体生长规律 分批培养：将少量的细菌接种到一定体积的液体培养基中，在适宜的条件下培养，最后一次性收获的过程。 生长曲线：细菌在新的适宜的环境中生长、繁殖、衰老、死亡的动态变化。 根据细菌生长繁殖速率将生长曲线分四个阶段： 缓慢期 　对数期 　　　稳定期 　　 衰亡期 1）延滞期 特点： 分裂迟缓，生长速率等于零 代谢活跃，细胞合成新的成分 – 补充消耗的材料 – 适应新的培养基 细胞形态变大或变长 对外界不良环境敏感 滞留适应期 产生原因： （1）接种时的机械损伤引 （2） 细胞分裂必需因子的缺乏 影响延滞期长短的因素 接种菌龄: 对数期“种子”，延滞期较短； 延滞期或衰亡期“种子”,延滞期较长； 接种量：接种量大，延滞期较短； 接种量小，延滞期较长； 培养基成分:培养基成分丰富的， 延滞期较短； 培养基成分与种子培养基一致,延滞期较短； 菌株的遗传性 研究滞留适期长短的意义？ 2）指数期 特点： 代谢活性强，生长速率最快，细胞呈指数增长 世代时短而稳定，生长速率恒定 群体的生理特性较一致 对数生长期 对数期（指数生长期） Nt=2n N0 n=3.33(lgNt-lgN0) G=t/n=0.301t/(lgNt-lgN0) n——繁殖代数 G——世代时(每繁殖一代所需的时间) N0——对数生长期开始微生物数量 Nt——对数生长期经过时间t后微生物数量 影响指数期的因素 菌种： 不同菌种的代时差异极大 营养成分：营养越丰富，代时越短 营养物浓度：影响微生物的生长速率和总生长量 培养温度：影响微生物的生长速率 指数期的实践意义 是代谢、生理研究的良好材料 是增殖噬菌体的最适宿主菌龄 是发酵生产中用作“种子”的最佳种龄 G+染色鉴定时采用此期微生物 3）稳定期 特点： 活细胞总数维持不变，即新繁殖的细胞数与衰亡的细胞数相等，菌体总数达到最高点。 部分细菌大量积累代谢产物 群体细胞生长速率为零 细胞生理上处于衰老，代谢活力钝化，细胞成分合成缓慢， G+染色发生变化。 最高生长量期 为何细胞总数不再增加？ 营养物质被消耗不能满足生长需要 代谢废物或有害物质积累到抑制生长水平 pH、氧化还原势等物化条件越来越不适应 稳定期的实践意义 是发酵生产中以菌体为终产品的最佳收获期； 某些代谢产物特别是次生代谢产物发生在此阶段，某些细菌的芽孢也发生在此阶段，故又称作代谢产物合成期； 导致了连续培养原理的提出和工艺技术的改进。 4）衰亡期 特点： 菌体活性降低、大量死亡； 细胞畸变、自溶 革兰氏染色不稳定 衰亡期 影响衰亡期的因素及实践意义 与菌种的遗传特性有关: 有些细菌的培养经历所有的各个生长时期，几天以后死亡, 有些细菌培养几个月乃至几年以后仍然有一些活的细胞； 与是否产芽孢有关：产芽孢的细菌更易于幸存下来； 与营养物质和有毒物质有关：补充营养和能源，以及中和环境毒性，可以减缓死亡期细胞的死