第三章 色谱法(液相)课题.ppt

第三章 色谱分析法 高效液相色谱分析 高效液相色谱法对比气相色谱法的相同点 基本理论一致：保留值、分配系数、分配比、塔板理论、速率理论等 定性、定量原理和方法一致 仪器结构和操作技术一致 均可与其他仪器联用，以研究复杂混合物 高效液相色谱法对比气相色谱法的优点 对于高沸点（＞500℃） 、热稳定性差，相对分子质量大（M＞400）的有机物（占有机物总数的75～80%）原则上都可分离 流动相选择余地广 固定相是新型吸附剂，以化学键合固定相居多 样品的回收比较容易 高效液相色谱法对比气相色谱法的缺点 仪器原理及结构有差别 流动相性质不同，使速率理论参数不同 缺少通用型检测器 “柱外效应”对柱效率及色谱分离影响较大 流动相价格较高 流动相有毒 高效液相色谱法的特点 高压：150～350×105Pa 高速： 高效：气相色谱n约为2000塔板/米 液相色谱n约为30000塔板/米 高灵敏度：紫外检测器：10-9g 荧光检测器：10-11g 3.2 高效液相色谱的基本理论(P356) 色谱分离的基本理论 塔板理论 速率理论 速率理论 式中A，B，C为三个常数，其中A称为涡流扩散项，B为分子扩散系数，C为传质阻力系数。 3.2.1 气相色谱的速率理论 涡流扩散示意图 涡流扩散引起的峰展宽的大小： A = 2λdP 式中：λ为填充不规则因子，它由填料颗粒直径dP、粒度范围和柱填充状况决定。 对于空心毛细管柱，A项为零。 填料粒径对A项的影响 纵向分子扩散使峰展宽 (a) 柱内谱带构型 (b) 相应的响应信号 纵向扩散与组分在柱内的保留时间有关。 Dg为组分在气相中的扩散系数（单位为cm2·s-1）。 Dg 反比于载气密度（相对分子质量）的平方根。 Dg随柱温增高而增加，但反比于柱压。 γ是因载体填充在柱内而引起气体扩散路径弯曲的因数（弯曲因子）。 弯曲因子γ为与填充物有关的因素。 若组分通过空心毛细管柱，γ=1；在填充柱中，γ1。对于硅藻土担体，γ=0.5~0.7。 气相传质阻力系数Cg 液相传质阻力系数Cl 传质阻力引起非平衡过程示意图 所谓气相传质过程（ Cg ）是指试样组分从气相移动到固定相表面的过程，在这一过程中试样组分将在两相间进行质量交换，即进行浓度分配。 对于填充柱 所谓液相传质过程（ Cl ）是指试样组分从固定相的气液界面移动到液相内部，并发生质量交换，达到分配平衡，然后又返回气液界面的传质过程。液相传质阻力系数 Cl为 df为固定相的液膜厚度 对于填充式色谱柱，填充均匀程度、担体粒度、保留时间、载气种类、载气流速、柱温、柱压、固定相液膜厚度等对柱效、峰扩张的影响。 填充柱的u最佳和H最佳 3.2.2 毛细管色谱柱 Golay方程 H=B/u+Cg?u+Cl?u 式中，A=0，B=2Dg 气相传质系数 r0为空心柱内径 液相传质系数同填充柱。 3.2.3 液相色谱(P356) He = 2λdp 0 影响峰扩散的主要物理性质 固定相传质阻力项(Hm) 流动相传质阻力项(Hs＋Hsm) 固定相传质阻力项Hs 式中， df为液膜厚度， Ds为试样分子在固定液内的扩散系数，Cs为与容量因子k有关的系数。 流动相传质阻力项 流动的流动相中的传质阻力项Hm 滞留的流动相中的传质阻力项Hsm 流动的流动相中的传质阻力项Hm 式中Cm是一常数，是容量因子k的函数，其值取决于柱直径、形状和填充的填料结构。 滞留的流动相中的传质阻力项Hsm 式中Csm是一常数，它与颗粒微孔中被流动相所占据部分的分数以及容量因子有关。 Giddings方程 液相色谱的H-u曲线 固定相粒度大小对板高的影响 LC和GC的H－u图 柱外效应 柱前峰展宽：主要由进样所引起 柱后展宽：主要由接管、检测器流通池体积所引起 3.3.1 液-固色谱 其作用机制是溶质分子（ X ）和