二氢黄酮类.ppt

3-OH，4-酮基络合物稳定性＞ 5－OH，4-酮基络合物 原因： ＞ 4．镁盐 ——鉴别两类二氢黄酮 二氢黄酮 Mg(Ac)2 二氢黄酮醇 天蓝色荧光 喷洒 黄酮、黄酮醇及异黄酮—— 显黄色～橙黄色～褐色 5. 氯化锶（SrCl2） ——鉴别邻二OH 具邻二酚OH黄酮类/氨性甲醇 绿色～棕色乃至黑色↓ （三）硼酸显色反应 具5－OH 的黄酮 2－OH查耳酮 硼酸 （四）碱性试剂显色反应 在日光及紫外光下，通过纸斑反应，观察样品用碱性试剂处理后的颜色变化情况，对于鉴别黄酮类化合物有一定意义。 亮黄色 酸性液 第三节 黄酮类化合物的提取与分离 一、提 取 存在形式： 花、叶、果等组织中——苷 木部坚硬组织中——游离苷元 选择溶剂： 黄酮苷，极性稍大的苷元 —— 丙酮、 醋酸乙酯、乙醇、水、 甲醇-水（1：1）、甲醇 花青素类——可加少量酸（如 0.l％盐酸） 黄酮苷元——宜用极性较小的溶剂 （氯仿、乙醚、醋酸乙酯）等提取 多糖苷类——沸水提取 对得到的粗提取物可进行精制处理，常用的方法有： （一）溶剂萃取法 1．醇浸液、去脂杂——加p.e ２．水提取去水杂——加多倍量高度醇 （二）碱提取酸沉淀法 ——适合酸性成分 ——具有Ar-OH的黄酮 药材 碱水液 H+ OH- 沉淀 （黄酮苷，苷元） 水 （水杂，M+） （三）炭粉吸附法——适于苷类的精制 甲醇粗提液 活性炭 黄酮—活性炭 沸水 沸甲醇 7％酚/水 15%酚/醇 （四）树脂吸附提取法 ——适于苷类的精制 二、分 离 分离黄酮的依据： （1）极性大小不同——吸附层析 （2）分配比不同——分配层析 （3）酸性不同——pH梯度萃取法 （4）MW大小不同——葡聚糖凝胶分子筛 或膜技术 （5）官能团——络合，沉淀等 （一）柱色谱法 1．硅胶柱色谱 适于分离异黄酮、二氢黄酮（醇）及 高度甲基化（或乙醚化）的黄酮（醇）类 常用的分离方法有柱层析法、萃取法、 铅盐法、HPLC法、薄层层析法等。 常用的吸附剂或载体有硅胶、聚酰胺及纤维 素粉等。也有用氧化铝、氧化镁及硅藻土等。 ?（1）分离对象：酚、醌、硝基化合物 2．聚酰胺柱色谱 （2）原 理：氢键吸附 （3）影响因素： 黄酮类分子中羟基的数目与位置 溶剂与黄酮类 溶剂与聚酰胺 之间形成氢键缔合 能力的大小 （4）洗脱规律（先→后顺序） 叁糖苷＞双糖苷＞单糖苷＞苷元 ① 苷元相同： ③ -OH位置： C=O 邻位-OH黄酮＞C=O对位 （或间位）-OH黄酮 ② -OH多少：酚羟基少＞羟基多 ＞ ④ 黄酮类型： 异黄酮＞二氢黄酮醇＞黄酮＞黄酮醇 ⑤ 芳香程度： 芳香程度高，共轭双键多吸附力 ＞芳香程度高，共轭双键少 二氢黄酮＞查耳酮 ⑥ 溶剂影响： ＞ 聚酰胺的双重色谱性 以含水移动相（如甲醇一水）作洗脱剂，苷比苷元先洗下来。 以有机溶剂作洗脱剂 （如氯仿一甲醇）苷元比 苷先洗脱下来。 极性移动相（含水 溶剂系统）洗脱时 有机溶剂（如氯仿一甲醇）洗脱时 聚酰胺— 非极性固定相 极性固定相 色谱行为 类似反相分配色谱 正相分配色谱 苷极性＞苷元 苷元极性＜苷 苷先洗脱 苷元易洗脱 3．葡聚糖凝胶柱色谱 分离黄酮类化合物的机理：双重性 分离黄酮苷元——靠吸附作用 羟基少，极性小，吸附力弱，先被洗脱。 分离黄酮苷时——分子筛性质起主导作用 糖数量多，分子量大，分子筛时，先洗脱 下来。 （二）梯度pH萃取法 ——酸性不同的黄酮苷元的分离 酸性： 7,4’- OH＞7-或 4’-OH＞ 一般Ar-OH ＞5-OH 5%NaHCO3 5%Na2CO2 0.2%NaOH 4%NaOH 溶解 的碱水 （三）根据分子中某些特定官能团进 行分离 H3BO3络合反应（邻二酚羟基） 2. Pb(Ac)2沉淀反应（邻二酚羟基） 3. 碱性醋酸铅（不具邻二酚羟基黄酮） 注意脱铅 第四节 黄酮类化合物的检识与结构测定 测定一般步骤： （1）化学反应— （2）PC、TLC— （3）UV光谱— （4）1H-NMR （5）MS （6）13C-NMR 一 化学反应——确定化合物的类别 二、色谱法在黄酮类鉴定中的应用