第四章 发酵工业的无菌课题.ppt

本章内容 一、染菌的防治 A．细菌 谷氨酸：发酵周期短，培养基不太丰富，较少染杂菌，但噬菌体威胁大。 B. 霉菌 PenG：青霉素水解酶上升，PenG迅速破坏，发酵一无所获。 柠檬酸：pH2.0，不易染菌，主要防止前期染菌。 “死角” 发酵罐的“死角” 法兰、内衬、接口、表头、罐内部件及其支撑件如搅拌轴拉杆、联轴器、冷却盘管、挡板、空气分布管及其支撑件。 口：人孔（或手孔）、排风管接口、灯孔、视镜口、进料管口 发酵罐罐底脓疱状积垢造成“死角” 消除方法：加强清洗并定期铲除污垢；安装放汽边阀 管道安装不当或配置不合理形成的“死角” 1、染菌的检查 （1）显微镜检查法（最简单、最直接、最经常） （2）平板划线培养或斜面培养检查法； 平板制好后，应先保温24小时，确定无菌 （3）肉汤培养基检查法（酚红变色pH6.8-8.4） 2、以上3种检查法的不足 以上3种检查法未发现染菌，还不能肯定未被染菌； 原因是以上检查法只能检查杂菌浓度较大的染菌情况（1个/ml） 第二节发酵工业的无菌技术——灭菌方法 干热灭菌法 湿热灭菌法 射线灭菌法 化学药剂灭菌法 过滤除菌法 火焰灭菌法 第三节 培养基及设备灭菌 一、湿热灭菌原理 二、分批灭菌（实罐灭菌） 三、连续灭菌（连消） 四、分批灭菌与连续灭菌的比较 一、湿热灭菌原理 1. 热阻 2. 微生物热死定律：对数残留定律 3.灭菌温度和时间的选择 4. 影响培养基灭菌的其它因素 1. 热阻 定义：微生物对热的抵抗力称为热阻，可用比死亡速率常数k的倒数来表示 。 k↓，热阻↑, t↑ 当温度T一定时，k随微生物不同而不同，具体计算时，可取细菌芽孢的k值为标准。 当 T 变化时，k有很大变化，其变化遵从阿累尼乌斯定律 k=Aexp(- △E/RT) ∴ k与微生物活化能及T有关 2.对数残留定律 在一定温度下，微生物受热致死遵循分子反应速度理论，微生物受热死亡的速率-dN/dt与任何瞬间残留的活菌数N成正比，即 当Nt=0时， t=∞， 无意义，也不可能。 一般采用Nt=0.001，即1000次灭菌中只有一次失败。 非对数残留定律 某些微生物受热死亡的速率不符合对数残留定律：如一些微生物芽孢。 kR ks NR Ns ND dNR/dt=-kR NR →Nt/N0=KR/(kR-kS) [ekst-ks/kR e-kRt] dNs/dt =kR NR -ks Ns ] 式中NR：耐热性活芽孢数；Ns：敏感性活芽孢数 ND：死亡的芽孢数；kR：耐热性芽孢的比死亡速率； ks：敏感性芽孢的比死亡速率； N0：初始活芽孢数。 ∴在T相同时，对数与非对数定律的灭菌时间t不同。 3. 灭菌温度和时间的选择 培养物质受热破坏也可看作一级反应： 式中C：对热不稳定物质的浓度；k’：分解速度常数； k’的变化也遵循阿累尼乌斯方程： 当T1 →T2 ㏑(k2/k1)/㏑(k2’/k1’)=ΔE/ΔE’1 (∵ΔEΔE’) ∴随着T上升，菌死亡速率增加倍数大于培养基成分分解速率增加倍数，故一般选择高温快速灭菌 。 4. 影响培养基灭菌的其它因素 （1）培养基成分 油脂、糖类及一定浓度的蛋白质、高浓度有机物等增加微生物的耐热性 低浓度（1%-2%）NaCl对微生物有保护作用，随着浓度增加，保护作用减弱，当浓度达8%-10%以上，则减弱微生物的耐热性。 （4）泡沫：泡沫中的空气形成隔热层，对灭菌极为不利，可加入少量消泡剂 。 二、分批灭菌（实罐灭菌） 1.灭菌工艺过程 分空气过滤器灭菌 并用空气吹干 2. 灭菌时间的估算 升温、冷却两阶段也有一定的灭菌效果，考虑到灭菌的可靠性主要在保温阶段进行，故可以简单地利用式 ㏑(N/N0) =-kt 来粗略估算灭菌所需时间。 例1：有一发酵罐内装40m3培养基，在1210C温度下实罐灭菌，原污染程度为每1ml有2×105个耐热细菌芽孢，已知1210C时灭菌速度常数k=