实验九：血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳课件.pptVIP

实验九：醋酸纤维素薄膜电泳 一、实验目的 了解生物大分子的电泳分离原理 了解电泳的基本操作方法 二、实验原理 电泳和电泳技术：混悬于溶液中的带电质点在外加电场作用下，向着与之带相异电荷的电极方向移动的现象叫做“电泳”。利用电泳现象来达到将多组分物质分离分析或分离制备的技术叫做电泳技术。 醋酸纤维素薄膜电泳：蛋白电泳支持介质的种类较多，如滤纸、醋酸纤维素膜、琼脂糖等。蛋白质和氨基酸都是两性电解质，其分子中的羧基（—COOH）和氨基（—NH2）在溶液中均可解离。血清蛋白质的等电点均低于pH7.0，在pH8.6的缓冲液中带负电，向阳极移动，分子小且带电荷多者，则移动速度较快。 三 实验试剂 １、电泳缓冲液（PH＝8.6，巴比妥酸－巴比妥钠缓冲液） ２、血清蛋白染色液（氨基黑试剂） ３、漂洗液（乙醇－醋酸溶液） 四 、实验操作步骤 醋酸纤维素薄膜电泳： １、薄膜的准备：薄膜在毛面距短边１．５ｃｍ处用铅笔轻轻划一条点样线。浸入电泳缓冲液，充分浸泡，３０分钟左右。（取出膜片并用滤纸吸去多余的缓冲液，不可吸得过干） ２、电泳槽准备：电泳槽里加入缓冲液，用两张大滤纸的一端铺在电泳槽支架上，另一端浸入缓冲液。（滤纸桥）待滤纸吸饱缓冲液后，用玻璃棒轻轻擀走气泡，使粗滤纸紧贴在支架上。 ３、点样：用玻璃棒蘸取血清少量，在载玻片短边中央的一段轻轻涂布适量血清，均匀点压在