第二十一章microRNA检测技术在临床的应用.pptVIP

第一节 概述 一、 miRNA概念与特点 (一) miRNA概念 miRNA是一类进化上保守的单链非编码小分子RNA，定位于RNA前体的3‘端或5’端，具有在翻译水平调控基因表达的功能。 第一节 概述 一、 miRNA概念与特点 （二）miRNA基本特征 1.结构特征 2. miRNA的存在形式 3. 保守性 4.时空特异性 第一节 概述 一、 miRNA概念与特点 （三）不同生物的miRNA特点 植物与动物miRNA的区别 第一节 概述 一、 miRNA概念与特点 （四）miRNA与siRNA的比较 1.miRNA与siRNA相同之处 （1）二者的长度都约在22nt左右。 （2）二者都依赖Dicer酶的加工，是Dicer的产物，所以具有Dicer产物的特点: 5＇端磷酸，3＇端均有2个游离核苷酸。 （3）miRNA和siRNA合成都是由双链的RNA或RNA前体形成的。 （4）二者都是RNA诱导的基因沉默复合体 (RNA induced silencing complex，RISC)组分，都具有组成RISC复合体的Argonaute蛋白家族，其功能界限已变得不清晰，如二者在介导沉默机制上有重叠。 第一节 概述 一、 miRNA概念与特点 （四）miRNA与siRNA的比较 2.miRNA和siRNA区别： （1）根本区别是miRNA是内源的，在基因组中有固定的基因座位；siRNA可以是人工体外合成的，也可以是基因组的转录片断，降解片断和转座片断，病毒基因组转录片断等，。 （2）二者结构上没有本质区别，功能分子都是单链RNA，miRNA转录出来时必然是发夹状的，siRNA可以由完全互补的双链切断而来，也可以从发夹来。 （3）本质区别在于作用位点上，miRNA作用于固定的靶基因，有特定的作用位点，一般在靶基因3′-UTR区，而siRNA由于是随机产生的或者人工设计的，因此作用位点可以设计或改变，可作用于mRNA的任何部位。 （4）在作用方式上，没有本质区别，是否降解或翻译抑制取决于互补程度，siRNA也可抑制靶标基因的翻译。 （5）miRNA的生理功能在于调控发育分化和调亡，适时调节内源基因表达，而siRNA是生物抵抗外来核酸片断入侵的一种方式，原始作用是抑制转座子活性和病毒感染。 第一节 概述 二、miRNA生物合成与功能 （一）miRNA生物合成 第一节 概述 二、miRNA生物合成与功能 （一）miRNA生物合成 第一节 概述 二、miRNA生物合成与功能 （一）miRNA生物合成 第一节 概述 二、miRNA生物合成与功能 （二）miRNA 生物学功能 1.miRNA调控基因表达机制 第一节 概述 二、miRNA生物合成与功能 （二）miRNA 生物学功能 2 .miRNA调控基因表达的特征与优点 （1） miRNA调控基因表达的特点 1）交叉调节 ; 2）自我调节; 3）可逆性调节. （2） miRNA调控基因表达的优点 1）与蛋白水平的调节相比，更加节省能量 2） 与转录水平调节相比， miRNA 调节更迅速，而且是可逆的 3）内含子所编码的 miRNA 是一种对基因组资源的高效利用 第一节 概述 三．miRNA应用 （一）基因功能的分析 （二） miRNA 功能和效应的评价 （三） 新型基因治疗方案的设计和发展 （四）抗病毒疫苗的设计和研制 （五）功能缺失转基因动物的建立 第二节 miRNA检测与定量方法 一、理想的miRNA检测与定量方法miRNA检测 1.具有足够的灵敏性检测到少量的miRNA； 2.具有足够的特异性足以分辨一个碱基差异的 miRNA； 3.能够进行miRNA表达的定量分析； 4.进行多样本平行检测；检测过程简便、经济。 第二节 miRNA检测与定量方法 二、几种常用miRNA检测与定量的方法 （一）基因芯片技术 miRNA microarray可以检测组织特异的miRNA,并且实验结果可重复率高。这种微芯片不仅可以检测miRNA的类型,还可以对其进行定量。它可以一次在同一样本中检测出几百个基因的全部表达;通过设计适当的寡核苷酸探针,同时检测成熟的miRNA及其前体分子; miRNA microarray可以用于高通量的筛选miRNA,并且可以用于临床病例的筛选。 第二节 miRNA检测与定量方法 二、几种常用miRNA检测与定量的方法 （一）基因芯片