20071016-质粒DNA的提取及定量定性分析课件.pptVIP

QA 关于PCR结果分析 关于产物回收①漂洗作用：换缓冲液，除杂②乙醇：保存目的产物③离心：去乙醇，除液体，保证后续工作④补救：勿轻易弃置； 高盐结合，重复漂洗。 关于………… 质粒DNA的提取及其定性定量分析 主要内容 一、质粒DNA提取 二、琼脂糖电泳鉴定及半定量 三、紫外吸收定量及纯度检测 基本原理 结构差别 分子量差别 变性－复性 一、质粒DNA的提取流 程 二、质粒DNA的电泳 DNA 重 组－酶切和连接 * 1 2 3 4 5 6 M 7 8 9 10 11 12 Fig. 1 Agarose Electrophoresis analysis of the PCR products. Lane 1～Lane 12：products of PCR M：DNA marker （from top to bottom：2000bp，1000bp，750bp，500bp，250bp，100bp） 引物或其二聚体 问题： ①10泳道：上样错位？错误模板？引入污染？热启动不够？ 回收，重新电泳鉴定。 ②1、12泳道：未加引物或模板。 相邻泳道溢出污染 非特异性！ Good ！！PCR仪中的位置 边缘效应？ ！ 胶融！外溢 胶融！ 基因的克隆与表达专题之