安徽医大精品课程生物化学第二章核酸的结构和功能.pptVIP

第 二 章核酸的结构和功能 Structure and Function of Nucleic Acid 一、核酸的发现和研究工作进展 1868年 Fridrich Miescher从脓细胞中提取“核素” 1944年 Avery等人证实DNA是遗传物质 1953年 Watson和Crick发现DNA的双螺旋结构 1968年 Nirenberg发现遗传密码 1975年 Temin和Baltimore发现逆转录酶 1981年 Gilbert和Sanger建立DNA 测序方法 1985年 Mullis发明PCR 技术 1990年 美国启动人类基因组计划(HGP) 1994年 中国人类基因组计划启动 2001年 美、英等国完成人类基因组计划基本框架 DNA中含有的碱基是：A T C G RNA中含有的碱基是：A U C G 紫外吸收的特性（共轭双键） 吸收波长：260nm 用于定量测定 核苷：戊糖与含氮碱基脱水缩合而生成 糖苷键 假尿嘧啶（Ψ）核苷 的糖苷键不是C-N键，而是C-C键 核苷酸的结构与命名 体内重要的游离核苷酸及其衍生物 含核苷酸的生物活性物质： NAD+、NADP+、CoA-SH、FAD 等都含有 AMP 二、核酸的一级结构 定义: 核酸中核苷酸的排列顺序。 由于核苷酸间的差异主要是碱基不同，所以也称为碱基序列。 三、DNA的功能 RNA通常以单链形式存在，但也可形成局部的双螺旋结构。 RNA分子的种类较多，分子大小变化较大，功能多样化。 * tRNA的一级结构特点 tRNA是分子最小(70～90个核苷酸） 含 10-20% 稀有碱基，如 DHU、?等 3′末端为 — CCA-OH(氨基酸臂） 5′末端大多数为G 具有 T?C tRNATyr: 可以和Tyr结合的tRNA Tyr-tRNATyr : 结合了Tyr的tRNA 一、核酸的一般理化性质 核酸具有酸性； DNA分子粘度大；RNA 分子粘度小 能吸收紫外光，最大吸收峰为260nm。可用于核酸的定性和定量测定。 热变性 解链曲线：如果在连续加热DNA的过程中以温度对A260（absorbance，A，A260代表溶液在260nm处的吸光率）值作图，所得的曲线称为解链曲线。 探针技术 利用核酸的分子杂交，可以确定或寻找不同物种中具有同源顺序的DNA或RNA片段。 在核酸杂交分析过程中，常将已知顺序的核酸片段用放射性同位素或生物素进行标记。这种带有一定标记的已知顺序的核酸片段称为探针。 第五节 核 酸 酶 Nuclease 1. DNA或RNA的定量 OD260=1.0相当于 50μg/ml双链DNA 40μg/ml单链DNA（或RNA） 20μg/ml寡核苷酸 2.判断核酸样品的纯度 DNA纯品: OD260/OD280 = 1.8 RNA纯品: OD260/OD280 = 2.0 OD260的应用 二、DNA的变性(denaturation) 定义：在某些理化因素作用下，DNA双链解开成两条单链的过程。 方法：过量酸，碱，加热，变性试剂如尿素、 酰胺以及某些有机溶剂如乙醇、丙酮等。 变性后其它理化性质变化： 增色效应 粘度下降 比旋度下降 浮力密度升高 酸碱滴定曲线改变 生物活性丧失 DNA变性的本质是双链间氢键的断裂 例：变性引起紫外吸收值的改变 DNA的紫外吸收光谱 增色效应：DNA变性时其溶液OD260增高的现象。 Tm：变性是在一个相当窄的温度范围内完成，在这一范围内，紫外光吸收值达到最大值的50%时的温度称为DNA的解链温度，又称融解温度(melting temperature, Tm)。 Tm的高低与DNA分子中G+C的含量有关， G+C的含量越高，则Tm越高。 三、DNA的复性 DNA复性(renaturation)的定义 在适当条件下，变性DNA的两条互补链可恢复天然的双螺旋构象，这一现象称为复性。 减色效应 DNA复性时，其溶液OD260降低。 热变性的DNA经缓慢冷却后即可复性，这一过程称为退火(annealing) 。 两条来源不同的单链核酸（DNA或RNA），只要它们有大致相同的互补碱基顺序，在适宜的条件（温度及离子强度）下，经退火处理即可复性，形成新的杂种双螺旋，这一现象称为核酸的分子杂交。 四、分子杂交与探针技术 核酸杂交可以是DNA-DNA，也可以是DNA-RNA杂交。 不同来源的，具有大致相同互补碱基顺序的核酸片段称为同源顺序。 意义 DNA超螺旋结构整体或局部的拓扑学变化及其调控对于DNA复制和RNA转录过程具有关键作用。 （二）原核生物DNA的高级结构 （三）DNA在真