Polvhedrin融合家蚕溶菌酶BmLZM的表达、纯化与活性检测.docVIP

浙江理工大学 硕士学位论文 Polvhedrin融合家蚕溶菌酶BmLZM的表达、纯化与活性检测 姓名：何荣强 申请学位级别：硕士 专业：生物化学与分子生物学 指导教师：张耀洲 201202  ?? ????嗦??个氨基酸，预测分子量为?．? ?的??诱导工程菌后，裂 重组质粒转入大肠杆菌??????弥张ǘ任猯 ?附近的位置有一条特异性蛋白条带，和预期 ? ?．? 形式存在，故用超声裂解菌体后??? 化融合蛋白??甌?．?????。以野生杆状病毒??蛋白为抗原免疫雄性新西 抗体进行??? ????检测，确定重组融合蛋白已经成功表达。将纯化后的目 的融合蛋白经凝血酶酶切和离心后超滤，得到家蚕溶菌酶蛋?籅??。大肠杆  活性检测获得的重组???钠骄?副然钗??．? 关键词家蚕；家蚕溶菌酶；原核表达；多角体；纯化；活性； Ⅱ  ?? ? ? ???? ? ??甌? ???????? ?? ??? ???? ?? ? ???? ???? ??一刚?????瑆?? ???? ?? ? ???????? ?? ?? ??? ?．? ??????? ??． ?????癿 ???? ? ???? ?????? ?????? ??琻???????? ??? ? ?????? ??? ?? ? ? ????????? ???琤??? ????? ? ??? ????? ????? ?????? ?甤? ? ??? ??? ??? ? ? ? ?????? ??? ? ???? ??? ?? ??????．??????  ? ? ????? ????????? ??? ??? ???????．???? ?? ?? ??? ? ??? ??????? ??? ????? ? ????? ??? ? ??? ????? ????? ? ???琻? ????? ?? ???? ?? ???? ?????；?????； ??????；????． ?  缩略语 ?????? ????????? ???? ??????????? ?????????? ?? ??????? 脱氧核苷三磷酸 ???? ??? ??? ?????? 美国国立生物技术信息中心 开放阅读框 ??? ?? 多角体蛋白 十二烷基硫酸钠．聚丙烯酰胺 凝胶电泳 ??????????? ?琋，??琋?????????????? ???? ?琋，??琋’．四甲基乙二胺 凝血酶 ?? ??????????????  ??溶菌酶概述 ? ????，??，?型??????????， ?，有 ?隿型的??????．?对应，即参与构成酶有关的活性中心【?。 与其它?掷嘈筒煌?芤鹈覆煌??饽诖??呙剐??型?芫?赋?哂???，?甆． ??甦?????????活力，能够作用于??阴０?谒?位氧原子乙酰化细  的溶菌酶以及肺炎链球菌??????? ?? ? ? ??? ?? ???????  ? ?。没有细胞壁结构的细胞，如人类和哺乳动物细胞因为无肽聚糖，所以溶菌 酶对其是没有毒害作用的?】。 ??溶菌酶催化反应机制及稳定条件 壳中所含的多糖，仅由??谢?ü鼴 ?．?糖苷键连接而成，几丁质也是溶 菌酶的底物。 ? ? ??? ?? ??????? 溶菌酶活性最为理想条件是?℃，???．??。??对溶菌酶活性有良好的 促进作用，而碱或氧化剂则抑制其活性。溶菌酶的贮存方式若采用低温与干燥，  良好的刺激免疫和抑制疼痛的特殊功效【?】。 生物技术上，原生质体往往通过溶菌酶处理革兰氏阳性菌的方法来获得，因 此溶菌酶是一种不可或缺的、方便快捷的工具酶。国内外制备无细胞提取液就常 用对溶菌酶敏感的菌体配以合适的缓冲液后用该酶进行消化、水解。随着生物工 程技术的产业化经济的发展，溶菌酶制剂的需求也将日益突飞猛进??。 在农业上，作为一种安全、可靠的饲料添加剂，溶菌酶的使用可为畜牧业产 业增光添彩，为动物疾病的预防贡献不小??，同时还具备非专用性生长激素的 特殊功效??。 ??国内外溶菌酶生产现状及存在问题 国外企业则以发展动物内脏或微生物类工业产业化生产溶菌酶??，这样直  浙江理工大学硕士学位论文 虽然多角体蛋白是受感染的昆虫细胞内丰度最高的蛋白质，但其对于病毒的感染 以及在细胞内复制却是必需的，主要作用是形成多角体包涵体包埋病毒粒子，使 其免受外界不利环境的影响，为子代继续感染宿主提供保障。有关家蚕核型多角 体病毒的基因组信息，在上个世纪八十年代就已经研究的较为清楚了。如?? 年，???等【?】报道位于苜蓿银蚊夜蛾核型多角体病毒????的多角体蛋 体；??年，???取??勘ǖ莱疲?挥诩也现市投嘟翘宀《????衣壳蛋  活性。