Pdr5p跨膜螺旋6和7边界位点突变引起Pdr5p功能受损的机制研究.docVIP

浙江大学 硕士学位论文 Pdr5p跨膜螺旋6和7边界位点突变引起Pdr5p功能受损的机制研 究 姓名：李靖凯 申请学位级别：硕士 专业：生物物理专业 指导教师：管文军  通过研究这些突变菌株的药物敏感性、???匾煨訟?酶活以及蛋白定位、表  浙江人学硕士学位论文 ????? ? ????? ??? ????? ????? ?????琣????? ?? ???????瓵? ? ????? ? ? ??? ? ??????? ????琍?????? ??? ?????猺???? ??? ? ?????，????? ??????? ??? ??????? ?????????????? ?? ????? ????．???? ??? ?? ????? ???????瑀???? ??? ??? ??????? ????? ???? ??? ?? ??? ???? ? ??? ?? ???????甈?? ???? ??? ??? ????????瓵? ?? ??? ?? ? ? ???? ? ?? ???，? ???珻??? ??—???? ? ? ?? ??? ?????? ?? ??? ? ??? ?? ??? ??? ??? ? ??  ? ?????????? ?????? ??? ???? ????? ??????? ???? ???篠?????? ?????????琈???? ?????．  国家自然科学基金????  浙江大学硕上学位论文 第一章绪论 第一章绪论 ??致病真菌的多药物耐药性及其研究现状 ??????珻??? ?????】。尽管新的抗真菌药物不断被开发出 排底物的??鞍准易宥?裕??哐芯恳庖濉??俊８?菀阎5腁?转运蛋白类多 进行分类，可分为五类：??瓵，??狟，??瓹，??瓺，??瓽，如图??所示  浙江大学硕上学位论文 第一章绪论 多药耐药转运蛋白提出了一个底物转运的理论模型。如图??所示，在 ?篈??／?????? ?篈???????????? ?篈?·????，????‘? 构象下，跨膜螺旋区??????????，??识别结合底物，当核酸 结合结构域????? 区发生巨大的构象变化，变换成????猣????墓瓜螅??蓖馀诺孜颷???。 ● ’ 图??多药耐药转运蛋白药物分子外排理论模型 ? 在????杏肴死嘟】迪喙氐闹饕J荂  浙江人学硕士学位论文 第一章绪论 ? 籮 ? ? ? ? 妒 ? ? 甂 ? ? ? 籭 ? 畉 ， 、 ? ? — ?一 、 。：。：。?????。．。 ?????? ? ??? ?? ?產????械腃??在多药物转运中能够外排大量结构差异很大的药物分  第一章绪论 ??酿酒酵母中的多药耐药转运蛋白及调控网络 ???????是研究真核生物基因与基因簇功能理 想的模式菌种，由于基因组信息完善，遗传操作简便，很多致病真菌的研究都借 ?种直接或间接与多药物耐药性相关，如表??所示， 这些多药耐药转运蛋白  浙江人学硕十学位论文 第一章绪论 结合??启动子区的??元件来调控??的表达，同时??表达也受到 药物诱导????腿刃菘擞盏????????俊６訷??的研究相对较少，已 有的研究结果表明它能够转运有机阴离子如寡霉素并且与人类的囊性纤维化膜 用维持细胞在药物环境下的生存和正常生长。如图??所示，酿酒酵母耐药调控 近期研究发现一些新的锌指类调控因子， 如???且桓黾せ钜蜃樱??蚉??  浙江人学硕士学位论文 第一章绪论 图??酵母多药物耐药性调控网络???????? ????? 由于???诮峁购凸δ苌嫌隒??等致病真菌的多药耐药转运蛋白非常相似， 功能具有重要意义【?，?】。 进行同源建模，对蛋白的其它部分则依据相关预测规则和结晶结构信息进行建  浙江大学硕士学位论文 第一章绪论 ? ? ? 丁 麟 丁 纛霪纛纛纛魏 ， ‘ ? ： ， 甏瓤??》 心：￡? ? ?????  第一章绪论  浙江大学硕士学位论文 第一章绪论 是由于没有结晶结构，这些模型仍无法系统地解释很多问题，因此需要更多的研 ??研究课题的提出 大部分工作集中在??氲孜锸侗鸬墓叵怠??保守域功能以及??蚇? 别与胞质区和胞外区相连，对底物进出跨膜通道的结构具有重要作用。前期的研 ???。在本论文中，我们 建??随机突变菌株。然后利用氟康唑药物板筛选氟康唑高敏感菌株，从筛选 点，特别是那些位于跨膜螺旋片段两端的位点。最后通过氨基酸替代方法系统研  浙江大学硕上学位论文 第一章绪论  浙江人学硕士学位论文 ??材料与方法 实验中所用到的菌株及对应的基因型和质粒见附录。 ??约粒