PCR-MASA检测外周血K-ras基因点突变和CA19-9、CA242联合检测在胰腺癌诊断中的作用.docVIP

青岛大学 硕士学位论文 PCR--MASA检测外周血K--ras基因点突变和CA19--9、CA242联合 检测在胰腺癌诊断中的作用 姓名：吴昌亮 申请学位级别：硕士 专业：肝胆外科 指导教师：邱法波  目的：研究联合检测外周血?猺?基因突变和??．????在胰腺癌诊断中的作 用。方法：选择?胰腺癌和同期的?非胰腺癌病人，采用突变等位基因特异性扩增 ??．???觳庖认侔┗颊咄庵苎狵．?????坏阃槐洹５缁?Х⒐夥???? 检测??—????。统计分析检测结果。结果：胰腺癌患者外周血?畆?基因? 联合?畆?基因突变检测平行实验可以提高诊断胰腺癌的敏感度至?．?％。???、 ??．??＝崧郏??联合检测胰腺癌患者外周血????蛲槐浜虲? 一检测????蛲槐涮岣吡苏锒厦舾卸龋?欣?谝认侔┑恼锒稀??胰腺癌组中 ????蛲槐洹???????是否升高与患者性别、年龄、肿瘤大小、部位及肿 硕士研究生：吴昌亮?蔚ㄍ饪? 指导教师： 邱法波教授  ???? ?????????? ?????· ???? ?? ????? ???? ????? ??．?珻?? ?? ? ?? ?????? ??珻?? ???甌? ???? ????? ?? ?? ?????? ? ?? ? ??．????篢? ?膌?? ?苅? ?，???????? ? ????? ?撕?? ?? ????? ? ????? ?畆? ???、?????? ????? ? ????? ???? ?? ????? ?????琣? ? ??? ????? ????????? ????? ????? ? ????? ???．????????? ???琭??? ? ???????畆?????  胰腺癌在消化系统肿瘤中占有重要地位，研究胰腺癌对提高人民健康水平具有 十分重要的意义。胰腺癌是一恶性度较高的肿瘤，在美国的发病率高达?／????， 码子的点突变，并联合检测外周血??．?珻??。研究?畆?基因?密码子的点  ?甀标本收集 ??仪器设备 ??? ??????全自动电化学发光测定仪 深圳市新产业牛物医学工程有限公司 ? ??? ????珿??? 加样枪 ?????珿??? 水平板电泳仪????? ??? ??猂? ? 格兰仕，顺德市格兰仕电器实业有限公司 离心机 ??? ????? ?．?  ??? 上海医疗器械厂 ??甊?公司 莱阳开发区化工厂 上海振兴化工 上海生工生物工程有限公司 德国?????????公司 ??  青岛大学硕士学位论文 ??研究方法 查阅文献开题一收集实验组患者及对照组癌患者外周血标本一电化学发光法检 基因?位点突变一统计学分析一得出结论。 第二组????甊?的??甑谝桓鯣突变为??、?偷诙?鯣突变为 为???腁?， ??琓?型突变，片段长度为???腉?，??珿? 型突变????镄蛄屑?卤韑。 ??．??外周血标本的收集  ??：??? ??? ??．??采用全血基因组??樘崾约梁蟹ㄌ崛∪?;?蜃镈? 细胞裂解液，核裂解液， ?在??? ?室温孵育? ???沟琢呀庀赴????? ?移净上清，勿搅动白色沉淀。 ?向核裂解物中加入??溉芤?．??，颠倒??次混匀。??孵育? ?向核裂解物中加入蛋白沉淀液???，涡旋振荡?．?秒。  青岛大学硕士学位论文 ??？杉?咨?】樽碊?沉淀。 ???????椅吕胄? ??蚶胄墓苤屑尤隓?溶解液??．?，轻轻吹打，溶解????。?４鍰?。 ??．??．?怂岬鞍缀?坎舛ㄒ?紫外分光光度计??―? ??逑幢壬ū?蠹尤氤?克?? ???湃氡壬ú壑校?聪耣??键，待显示器 显示零后取出。 ??逑幢壬ū?蠹尤氤?克?? ? · ??直鸺觳飧髯檠?綝?纯度及浓度。 ? ? ??．??．?觳庋?綝?的质量  ??? “?? ?¨? ? ①将??? ④将离心后?????苤糜赑?仪进行反应。 ⑤反应产物进行琼脂糖凝胶电泳，或放于．?℃冰箱保存。 ???引物：?產??引物序列间表格 内参?．???引物序列  青岛大学硕士学位论文 ? ??????，加入到凝胶左侧第一个加样孔底部。 ? ? ??．?? ??．??．?酆厦噶捶从??? ?难?綝?模板的??? ? 中加入下表所示试剂。 ??逑????  样本??０????／?? ??? ???? ??? ??? ??? ? 用?．??全自动数码凝胶成像分析仪观察电泳结果并拍照，结果见下图??、 ?Ｄ?和枷穹治觯焊?莸缬窘峁??绻鸎．???虻??幻苈胱佑梢吧?虶?突 没有目的条带的出现则说明没有突变，突变为阴性。重复检测?伪苊饧傺粜灶琂。 ?癈?????换鹾?????琍????