TIMp-2基因转染豚鼠FDM模型后部巩膜MMp-2蛋白表达的变化.docVIP

青岛大学 硕士学位论文 TIMP--2基因转染豚鼠FDM模型后部巩膜MMP--2蛋白表达的变化 姓名：李瑞凤 申请学位级别：硕士 专业：眼科学 指导教师：刘桂香  ????基因转染豚鼠??Ｐ秃蟛抗????蛋白表达的变化 ??魇笛樽榧渖綪?蛋白表达：???组后极部巩膜删??酶原及活性 时间延长出现先降低后略回升的动态改变，早期即可有效抑制后极部巩膜???蛋 硕士研究生：李瑞凤?劭蒲? 指导教师： 刘桂香教授  ?? ??? ????? ? ??·?????? ??? ?? ? ? ? ? ??? ? ? ?? ?????????? ? ? ???瑂? ??? ?? ?????? ? ? ? ? ??． ????? ?? ? ???????????????琫?? ??? ? ?? ????? ??? ? ? ?? ? ? ? ???瑂? ? ? ? ????? ? ??? ? ??? ? ? ?? ??????．??瓸? ??． ????? ????? ? ??? ? ? ? ? ? ? ???産? ? ? ? ? ?????????；???  引言 言 治疗近视的方法很多，如传统的验光配镜及现代各种屈光矫正手术，只矫正视力，没 有针对病因和发病机制进行治疗，更没有防治病理性近视引起的眼轴进行性增长、近 视加重及由此而导致致盲性并发症发生的方法。近年来，学者们进行研究，探索药物 对近视发生和病程的影响，以期探讨近视眼的病因和发病机制，并希望能通过药物来 治疗近视。 研究发现，近视眼轴变长的主要发生部位在眼球后段巩膜，特别是近视眼的后 ?????????????，???两者间的分泌失衡，其中最重要的是基 质金属蛋白酶．???? ???，??动物模型，  材料与方法 无锡市康宁医疗电子设备开发公司 苏州医疗器械 德国 上海医疗器械厂 ?甋?．??型制冰机 ?．．?℃冰箱 ?．???扫描系统 ?．高速低温台式离心机??型 ?．普通台式离心机 ?．可调式微量移液器 ?．电泳仪 法国???公司 ?．垂直电泳槽 ?．振荡器 ? ?．组织研磨机 ??? ??? ?  美国???公司 ?甋?—??上样缓冲液 ??鱌含量测定试剂盒 ’碧云天生物技术公司 ??? 大连宝生物工程有限公司 ?．?罫??? ??％分离胶 ?％丙烯酰胺 ? ? ??? ???．?? ? ??—??? ?  青岛大学硕士学位论文 ?．? 加入双蒸水后定容至???，备用。 ?％蒸馏水 ???动物模型制备：采用单眼形觉遮盖法???????????琈? ?  上下眼睑，在?点处剪开右眼球结膜，分离上方穹窿结膜，采用改良微量进样器， ??痷?淖H居蠺??? 基因的质粒、空质粒及生理盐水，注射完毕后快速抽出微量进样器，术中未发现脉 络膜出血。术后结膜囊内涂金霉素眼药膏。???组、空质粒组、生理盐水组右眼 完成注射操作后继续用眼罩遮盖；对照组右眼持续遮盖不作任何处理。 ??．?鹘好钙追ú舛∕??蛋白表达 ???一聚丙烯酸胺凝胶电泳 ?  青岛大学硕士学位论文 部两玻璃板之间的气泡。 液，混均上清液和缓冲液后，直接用??微量加样器吸取样品，沿着浓缩胶的加样 迁进入浓缩胶后换用恒压???脊?．?∈焙箐宸永家浦辆嗬敕掷虢旱撞??? 时关闭电源，终止电泳。 ?漂洗：取出凝胶，去除压缩胶，放入容器内，先用适量蒸馏水冲洗，然后加 ．?孵育：倒掉????蠹尤雔?? 时，注意防止液体蒸发。 ????婧阄孪渲蟹跤?小 ?染色：倒掉??? 出现两条清晰透明的明胶降解条带为止。 ??统计学分析 ?  材料与方法 ?  青岛人学硕十学位论文 结果 明胶酶普法检测结果显示，在凝胶上出现二条无色透明条带：分子量??的 ???组与空质粒组、生理盐水组、对照组、自身对照组后极部巩膜 组别????组 自身对照组 ? ????※ ? ????※ ????※  ???组后极部巩膜删??酶原及活性酶随转染时间不同而变化，转染后第? ?  ??一?榧白陨矶哉兆樽槟诤蠹ú抗?せ钚訫?一?南喽员泶锪苛搅奖冉蟩检验 ?  讨论 讨论 变，眼轴长度明显增加，豚鼠???锬Ｐ徒?⒊晒Α???仁笛橹っ鱈?】豚鼠形觉剥 巩膜的表达位于成纤维细胞胞浆和细胞外基质中。近视的发生与???活性增加密切 相关，吼????含量改变可能是巩膜成纤维细胞对视觉信号的最初反应。近视眼 删????表达水平升高，内源性???不足以抑制其表达，引起删??与???  ????是通过在特定靶细胞中表达该细胞本来不表达或表达 因表达产物起到治疗作用。随着基因治疗研究的进展，导入基因的种类可以是正常 ?  讨论 经??????