体外培养的准备与操作要点(研究生课程2)课件.pptVIP

一、细胞在体外生长的要求 环境要求：包括温度、pH值、气体、渗透压等； 营养要求：天然培养基与合成培养基 1、细胞培养的环境要求 温度：不同来源的细胞，其培养的最适温度不同。例如，昆虫及鱼类细胞25-28度，哺乳动物细胞一般为37-38度； 细胞对低温的耐受力比高温强。温度不低于0 ℃时，虽影响细胞代谢，但并无伤害作用；再把细胞置于25～35 ℃时，细胞仍能生存和生长，但速度减慢。若温度过低，在降到冰点以下时，细胞因胞外水和胞质结冰而受损死亡。 若向培养液中加入甘油或二甲基亚砜等，封入冻存管，置于液氮中，细胞可耐受－70 ℃以下温度，能长期储存，解冻后细胞复苏，仍能继续生长增殖，生物性状不受影响。 细胞在39～40 ℃培养1h，能受到一定损伤，但仍有可能恢复，但不能忍受温度再升高2 ℃，持续数小时，即在41～42 ℃中培养1h，细胞损伤严重，温度至43 ℃以上时细胞多数被杀死。 高温主要引起酶的灭活、类脂质破坏、核分裂的破坏，产生凝固酶使细胞发生凝固，另外是蛋白质变性。 pH值：动物细胞培养最适pH值为7.2-7.4，低于6.8或高于7.6均对细胞产生严重影响，甚至导致细胞死亡； 一般原代培养的细胞对pH值要求严格，细胞系对 一定范围的pH值改变有抵抗力。细胞对碱性不如对酸性的变化耐受，偏酸的条件比偏碱的环境对细胞生长有利。 随细胞数量的增多、代谢加强，释放CO2增多，使pH