第五章 有机溶剂中的酶催化作用.ppt

第五章 有机溶剂中的酶催化反应 第一节 非水介质中酶学基础 用于酶催化的非水介质包括： 含微量水的有机溶剂 与水混溶的有机溶剂和水形成的均一体系 水与有机溶剂形成的两相或多相体系 胶束与反胶束体系 超临界流体 气相 非水介质中酶的结构 有机介质中的酶促反应的优越性 原先的认识： 1）我们以前的酶学理论知道，酶溶解在水溶液中，而且酶一定是在水溶液中才能反应，又知道水是个极性分子，酶只能在极性溶剂中反应。 2）我们又知道有机溶剂是酶的变性剂，用了以后，应该在尽可能短的时间内去除有机溶剂，再把酶溶解于水中，以防止酶的变性和失活。 现在酶工程技术的发展，已经告诉我们，酶 反应可在有机介质中进行，已经成为酶工程、酶 化工研究的一个新的领域，开辟了一个新的研究 方向。 有机介质中酶促反应优越性被认为至少有以下优点： 1）有利于疏水性底物反应 2）提高酶反应T，加速反应V，提高酶反应稳定性。 3）可以催化一些在水相中不能进行的反应。 4）可以改变反应的平衡方向。 5）控制底物的专一性。 6）防止由水引起的付反应。 7）扩大反应的pH范围. 8）有利于酶的固定化。 9）酶、产物容易回收。 10）消除底物、产物的抑制作用。 11）防止微生物的污染。 第二节 反应条件： 一句话，条件要适宜,在一个特定条件下进行，。 一、 保证必需水含量 水是保证酶催化反应的必需条件，活性构象 是水分子直接或间接由氢键等非共价键相互作用来 维持。 因此与酶分子紧密结合的一单层水分子对催 化作用非常重要。而其他的水则相对不那么重要 (即由有机介质替代的那部分水不那么重要了）。 必需水：是维系酶构象稳定和酶催化活性所必需 的那部分最少量的水分子, 有时也叫结合水,或者束缚水。 只要那部分必需水不丢失, 其他的大部分水可 以由有机溶剂代替. 所以，有机介质中的酶促反应在微观上看是 水的酶反应，但是在宏观上看是有机介质中的酶反 应。如有的酶反应即使水只占0.015%， 酶仍然有 活性，可以进行酶反应, 而且反应速度非常快。 下面是一个胰脂肪酶的反应速度---水含量的关系图。 一般认为，一个酶结合水的过程分4步： 1.首先与酶分子表面的带电基团结合一部分水(0- 0.07g/g(水/酶))。 2.再与酶分子表面的极性基团结合一部分水(0.07-0.25g/g(水/酶))。 3.再聚集到表面相互作用较弱的部位(0.25-0.38g/g(水/酶))。 4.最后酶分子表面完全水合化，水分子覆盖酶分子表面。 二、必需水含量问题： 一般因酶分子本身, 或溶剂系统不同而有所不同。 如脂肪酶有几个水分子, 胰凝乳蛋白酶几十个水分子, 乙醇脱氢酶、多酚氧化酶有几百个水分子。 另外同一个酶在不同溶剂系统中含水也不同。 如胰凝乳蛋白酶，在甲苯中，含水0.5%； 氯仿等系统中，含水1.0%，酶活性最高。 一般酶要发挥它的催化活性，必须与有机溶剂系统获得水分以维持酶必要的水合状态。 三、 酶种类的选择 酶选择原则： 在有机介质中酶有不变性的潜在能力，即能保持酶催化活性的构象和催化能力。 由于酶的组成、结构、构象多样化，所以不能认为所有的酶都可以在有机介质中反应。 但是，一般现在的资料显示认为大多数酶可以做到。而有些酶在有机介质中可以进行，在水中却不能反应，如脂肪酶、蛋白酶、次黄嘌呤氧化酶、过氧化氢酶、过氧化物酶、醛缩酶、多酚氧化酶、醇脱氢酶、细胞色素氧化酶、ATP酶，胆固醇氧化酶等。这些酶有些属膜酶，在水溶液中反而不稳定。 酶是否适于在有机介质中反应，除与酶性质有关外，还取决于酶-底物、产物-溶剂间的关系问题。 这完全需要用实验来决定。 四、 酶形式的差别 酶在有机介质中的溶解特性、稳定性、活性等，对酶的选择很重要。 1） 将酶做成冻干粉，然后在有机介质中充分搅拌，超声波处理，使得颗粒变小，悬浮于介质中。 2）控制酶量的问题 需要适量。如α-凝乳蛋白酶在乙醇中的转脂反应，随着加酶量的下降，活性反而上升，速度快。 可能理由： 被认为在水含量不变的情况下，酶少到一个合适的浓度，可以使酶聚合体变小，反而增大了酶-底物接触的面，减少了底物扩散的限制，酶反应速度反而加快。 3）酶化学修饰的问题 化学修饰可以改变酶的一些理化性质，有利于酶在有机溶剂中的稳定性，原先不稳定的酶经