不同发酵参数及菌种对豆粕蛋白酶活的影响.docVIP

不同发酵参数及菌种对豆粕蛋白酶活的影响 　　摘 要：在不同条件下对豆粕进行发酵实验，测定发酵豆粕的综合营养价值，得出最优发酵条件;然后在最优发酵条件下采用枯草芽孢杆菌、黑曲霉、米曲霉进行发酵，通过测定，得出最优发酵菌种。 　　 关键词：最优发酵条件 枯草芽孢杆菌 黑曲霉 米曲霉 最优发酵菌种 　　发酵豆粕是一种利用有利微生物发酵而使原有的营养成分发生改变的豆粕，可以作为优良的饲料喂养牲畜，目前，已作为鱼粉最好的替代品风靡饲料行业，节约经济成本，增加产量，提高收入。 　　本文有两方面的研究内容，首先是用不同种微生物在同一条件下对豆粕进行发酵，然后对豆粕中蛋白酶酶活进行测定，看哪一种微生物发酵后的豆粕酶活最高，从而得出最优发酵菌种;其次是利用上次实验得出的最优菌种在不同条件（温度、湿度等）下对豆粕进行发酵，同样测定酶活，从而确定出最优发酵条件。 　　一、首先进行的是最优条件选择的实验，即在不同条件下用被人们广泛使用于豆粕发酵的菌种（米曲霉）发酵豆粕，从交叉实验的结果，测定酶活，选出最佳温度和最佳发酵时间，从而得出最优实验条件 　　采用米曲霉在不同发酵条件下，分别在不同温度、不同发酵时间下对豆粕进行发酵，温度选择为25℃、30℃、35℃，发酵时间选择为98h、100h、102h、104h，然后由不同温度和发酵时间做交叉实验，测定发酵后豆粕的营养价值指标，即粗脂肪、可溶性固形物以及酶活等指标，最后根据发酵所得豆粕的最优指标确定最适时间和温度。经实验发现，在30℃、102h的条件下，发酵豆粕的综合营养价值最高。在25℃、30℃、35℃下发酵豆粕的综合营养指标分别比未发酵豆粕高2.3倍、5.2倍、3.1倍，在98h、100h、102h、104h下发酵豆粕的综合营养价值指标分别高3.8倍、4.3倍、6.2倍、4.1倍。总的来看，在35℃、102h的条件下对豆粕进行发酵所得的营业物质含量高，酶活高，易被动物消化和吸收的小分子物质也高。 　　二、其次是最优发酵菌种的选择实验，即在上述实验得出的最优条件下选择哪一种菌种适合豆粕发酵，从而得到的豆粕酶活最高 　　在相对温和的条件下，分别利用米曲霉、枯草芽孢杆菌以及黑曲霉对豆粕进行发酵，然后对豆粕蛋白酶酶活进行测定，通过对比发酵前后酶活的变化，从而得出微生物发酵对豆粕营养特性的不同影响。蛋白酶活性的测定采用福林酚法[1]。 　　1.实验方法 　　1.1发酵豆粕的制备包括两个步骤 　　①菌种的活化 　　根据不同菌种的特性，将菌种转接到相同的液体培养基，在30℃，200r/min的条件下振荡培养不同时间（黑曲霉、米曲霉培养大约30h，枯草芽孢杆菌培养大约24h），有利于菌种最大限度的繁殖。 　　②菌种的转接 　　将已经活化好的不同菌种在同一环境下进行处理，在超净工作台中转入固态、灭菌后的发酵培养基中，把恒温培养箱内的温度调到30℃，然后把三角瓶放在箱内持续培养近102h。 　　1.2发酵豆粕中蛋白酶活性的测定方法 　　蛋白酶活性的测定我们通常采用福林酚法[2]。 　　2.豆粕发酵前后蛋白酶酶活的分析研究 　　利用微生物发酵豆粕其实是利用过程中微生物分泌的肽酶、蛋白酶等酶类，它们作用于大豆蛋白，直接把蛋白质分解成好吸收利用的游离氨基酸和具有生物活性的小肽蛋白，这样动物就可以通过肠道粘膜直接吸收，具有转运速度快、吸收速率快、不易饱和等的优点;既不存在与氨基酸吸收竞争，还能促进游离氨基酸的转运;更重要的是小肽分子的吸收耗能低，可以节省能量，大大提高了蛋白质的利用率。由表中数据可以看出，经过相同的时间发酵，不同菌种反应出来的是不同的发酵特征，发酵豆粕的酶活也不尽相同，其中经过米曲霉发酵的豆粕酶活最高。 　　豆粕发酵前后的蛋白酶酶活变化示意图 　　The protease activity’s change of soybean meal before and after fermentation 　　其实枯草芽孢杆菌、米曲霉以及黑曲霉这三种微生物发酵豆粕的蛋白酶酶活都是比较高的。在相同的条件（环境、温度、时间）下发酵，豆粕中酶活都有了很大的变化，其中经米曲霉发酵后的豆粕酶活最高，其次是黑曲霉，最后是枯草芽孢杆菌。由此可以得出，米曲霉是豆粕发酵的最优菌种。 　　三种微生物在相同条件下表现出不同发酵特征是跟它们本身菌种的性质有关。米曲霉可以产多种复合酶，蛋白酶是最主要的酶类，其次还有植酸酶、糖化酶、纤维素酶、淀粉酶等酶类，酶的种类丰富多样，可以很好的将淀粉、不易消化利用的大分子的蛋白质以及粗纤维类物质进行分解和降解，这也是为什么米曲霉发酵后豆粕酶活最高的原因之一。现在米曲霉在饲料、酿酒以及食品等行业的应用比较广泛，得到人们的一致认可。 　　三、总结