生化分析实验圆盘电泳.pptVIP

实验六 聚丙烯酰胺凝胶 圆盘电泳分离蛋白质 简述聚丙烯酰胺凝胶聚合的原理，如何调节凝胶的孔径? 2. 为什么样品会在浓缩胶中被压缩成层？ 3. 为什么在样品中加含有少许溴酚蓝的40％蔗糖溶液？蔗糖及溴酚蓝各有何用途？ 4. 上下两槽电泳缓冲液电泳后，能否混合存放？为什么？ 5. 根据实验过程的体会，总结如何做好聚丙烯酰胺垂直板电泳？哪些是关键步骤？ 6. 如何除去凝胶中过量的AP？未反应的单体如何除去？ 一、目的要求 1.学习聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳原理和技术 2.学习和掌握圆盘电泳分离蛋白质技术 二、原理 聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳和垂直平板电泳具有相同的原理。 不连续： 凝胶孔径不连续性；缓冲体系离子成分及pH值的不连续性；电位梯度的不连续性： 三种效应： 样品浓缩效应；分子筛效应；电荷效应 垂直平板：1、多个样品在同一块凝胶上，电泳条件一致－－便于利用各种鉴定 方法，直接比较各种样品区带，保证结果的准确可靠2、可以进行双向电泳3、电泳时热量容易消散，凝胶结果便于照相和易于制成干胶圆盘电泳：1、缺点是由于聚合效应，凝胶的长度和直径有细微差别，即使同一 样品在两个凝胶柱上以同样的条件电泳，其结果也会不同2、但是研究工作中还会用到圆盘电泳，例如 测定放射性标记的样品 测定蛋白质的生物活性；测定蛋白质分离的最适pH，凝胶浓