免疫实验1课件.pptVIP

医学免疫学实验（一） 【概述】 可溶性抗原如血清、毒素、细菌浸出液等与相应抗体结合，当两者比例合适、并有适量电解质存在时，形成肉眼可见的沉淀物或沉淀线，称为沉淀反应。 沉淀反应种类较多，可分为琼脂扩散试验、免疫电泳试验、环状沉淀试验及絮状沉淀试验等。 琼脂扩散试验 利用可溶性抗原与相应抗体在半固体琼脂内进行扩散，当两者比例合适时，就出现白色沉淀线，为阳性反应。 琼脂扩散试验可分为单向琼脂扩散试验（定量）和双向琼脂扩散试验（定性） 。 实验三、双向琼脂扩散试验 一、原理 又称琼脂扩散，是利用琼脂凝胶作介质的一种沉淀反应。可溶性抗原与相应抗体在半固体琼脂内进行扩散，当两者比例合适时，就出现白色沉淀线。 琼脂是多孔的网状结构，可使大分子物质通过，分子的扩散作用使分别两处的抗原抗体相遇，比例合适时形成沉淀线或沉淀弧。 沉淀线/弧的特征与位置取决于抗原分子的大小、结构、扩散系数和浓度等。当抗原、抗体存在多种体系时，会出现多条沉淀线/弧。 二、材料 载玻片、血凝板、纸样、打孔器、三角烧瓶、标签纸、吸水纸、湿盒等 抗人-IgG抗体、人-IgG抗体、琼脂粉 三、操作方法 1.制备琼脂板。称量0.6g琼脂粉加入装有50ml生理盐水的三角烧瓶，微波炉加热至完全溶解，用吸管吸取3.5~5ml琼脂溶液加至玻片，冷却后即为琼脂凝胶板。 2.稀释抗人-IgG抗体。 孔号 1 2 3 4 5 6 NS (ml) 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 抗人-IgG (ml) 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 稀释度 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 3.琼脂板按纸样打孔后加样。 中间孔加抗原(人-IgG) 1~6孔加已稀释好的抗体 4.置于湿盒，37?C 过夜 抗原 1 2 3 4 5 6 加样时注意宁少勿多，防 止试剂外溢。 次日观察结果 标签  四、结果 1 2 3 4 5 6 标签 观察白色沉淀线的形态，所测抗原稀释度最高孔确定为本次所测效价。 7 单向免疫扩散： 是定量抗原的一种检测方法。与双向扩散不同的是在琼脂中含有一定量的抗体，孔内加入未知量的相应抗原。在37度保温过程中，孔内的抗原向周围扩散，与抗体形成沉淀圈。根据沉淀圈的大小确定抗原的含量 Single immunodiffusion