实验步骤课件.pptVIP

实验操作 陈韵琳 农杆菌电转法 开电源按STE设电压（E.coli 1500v 农杆菌18000v） 用无水乙醇洗3次点转杯在冰上晾干 100ul感受态+1μl质粒，提前混入放于电转杯中 Push2×两下时间在5-6s 将1mlLB液体培养基加入电转杯中轻吸打1-2次，吸出放入离心管中 28℃摇菌1h 4000rpm 2min 100μl涂平板 28℃过夜培养挑单克隆，摇菌，进行PCR检测 平板制备 农杆菌平板的制备：LB100ml+kam（50mg/ml）100μl+RFP利福平（50mg/ml）100μl 潮霉素(Hyg) RFP利福平（50mg/ml）：0.05g用1ml甲醇溶解，过滤灭菌 50mg/ml卡那霉素(Kan):1g卡那霉素+20ml灭菌水（过滤灭菌） 胶回收/纯化 1.2%琼脂糖凝胶电泳电泳--上样--切胶--称重+同体积mem bind 55℃-65℃水浴溶胶 倒入小柱--静止1min-12000rcf1min 700μl men wash 12000rcf 1min 500μl men wash 12000rcf 1min 空管离心12000rcf2min 换新离心管小柱中加入50μl去离子水静止1min-12000rcf 1min 拟南芥的种植方法 种子放入1.5ml的离心管中+20％漂水1ml强烈震动20min， 灭菌水冲洗6次 0.1％的琼脂糖悬浮