第三课 DNA琼脂糖凝胶电泳课件.pptVIP

第四课 DNA琼脂糖凝胶电泳 实验原理 带电荷的物质在电场中的趋向运动称为电泳 迁移率（又称泳动率）是带电荷颗粒在一定电场强度下，单位时间内在介质中的迁移距离。迁移率与样品分子所带电荷密度、电压及电流成正比，与样品的分子大小、介质粘度及电阻成反比。 核酸是两性分子。DNA的等电点为4~4.5，RNA的等电点为2~2.5。当pH3.5时， DNA的碱基上的氨基解离，而三个磷酸集团只有第一个解离，整个核酸分子带正电荷。当pH在8.0以上时，碱基几乎不解离，磷酸集团全部解离，核酸分子带负电荷。不同大小和构象的核酸分子的电荷密度大致相同，在自由泳动时，迁移率差别很小。 琼脂糖是从海洋植物琼脂中提取而来并经糖基化修饰的聚合链线性分子。使用琼脂糖凝胶作为电泳支持介质，具有分子筛效应。电泳时，分子大小和构象不同的核酸分子在琼脂糖中的迁移率有较大差异，可以被有效分离。 琼脂糖凝胶电泳操作简单、快速，是分离、鉴定、纯化核酸分子的常用方法。 实验原理 琼脂糖凝胶浓度和有效分离线性DNA分子的长度之间的关系 实验原理 溴化乙锭（Ethidium bromide，EB）是一种高度灵敏的荧光染色剂，溴化乙锭用302nm和366nm紫外光激发并放射出590nm橙红色信号。 观察琼脂糖凝胶中DNA最常用的方法是利用溴化乙锭进行染色。溴化乙锭含有一个可以嵌入DNA堆积碱基之间的一个三环平面基团。它