针对注射用头孢替唑中细菌内毒素的检测研究.docVIP

针对注射用头孢替唑中细菌内毒素的检测研究 　　[摘 要]目的：建立快速的注射用头孢替唑细菌内毒素检查法，替代热原检查法。方法：用不同厂家的鲎试剂对不同批号的注射用头孢替唑分别进行干扰试验，考察确立注射用头孢替唑的内毒素检查法。结果：将注射用头孢替唑稀释至1.25 mg?mL-1以下可消除干扰作用，结果准确可靠。结论：注射用头孢替唑可以用细菌内毒素检查法取代热原检查法。 　　[关键词]注射 头孢替唑 细菌内毒素 检测研究 　　中图分类号：S261 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2015）16-0353-01 　　头孢替唑属于新型的头孢类药物，是国家近几年新研制成功的第四代头孢类药物，该药物最显著的优势就是抗菌谱广，通常被应用在败血症中，除此之外，还用于治疗呼吸系统感染疾病，在临床治疗中，也被应用在泌尿系统感染疾病等。虽然头孢替唑临床应用经验比较多，但是将其注射用头孢替唑的细菌内毒素的检测研究案例却不常见，本文将头孢替唑以粉针剂的形式来对细菌内毒素进行检查。传统的检查方法使用的热原检查方法，但是这种检查方法劣势比较多，因此以细菌内毒素检查方法来替代，以此来验证使用头孢替唑的安全可靠性。 　　一、材料 　　微量取液器（上海金林生化试剂仪器厂）；SW-80A型旋涡混合器（上海医科大学仪器厂）；细菌内毒素检查用水（批规格每支2mL，厦门鲎试剂实验厂）；细菌内毒素标准品（批规格每支10EU，厦门鲎试剂实验厂）；鲎试剂（批规格0.125EU?mL-1，厦门鲎试剂实验厂；批规格0.5EU?mL-1，厦门鲎试剂实验厂；批规格0.125EU?mL-1，湛江安度斯生物有限公司）；细菌内毒素检查用具（厦门鲎试剂实验厂）；注射用头孢替唑（每瓶1.0g，天津新丰制药有限公司，批20120923。 　　二、方法与结果 　　1、鲎试剂灵敏度（λb）复核 　　鲎试剂灵敏度复核[1]：将细菌内毒素工作标准品用细菌内毒素检查用水溶解，在旋涡混合器上混匀15min，然后制成1.0，0.5，0.25，0.125EU?mL-1的内毒素标准溶液，每稀释一步均应在旋涡混合器上混合30s。每一浓度平行做4支，每管加入待复核的鲎试剂0.1mL和内毒素标准溶液0.1mL。同时用细菌内毒素检查用水做2支阴性对照管，共18管，轻轻混匀后，封闭管口，垂直放入（37±1）℃适宜恒温器中，保温（60±2）min，结果0.5λbλc2λb，此批鲎试剂符合规定，可用于实验。同上所述方法（内毒素溶液的浓度选择0.25，0.125，0.06，0.03EU?mL-1），厦门鲎试剂灵敏度为0.125EU?mL-1，湛江鲎试剂灵敏度为0.125EU?mL-1灵敏度经检测符合要求。 　　2、初筛试验 　　2.1内毒素限值（L）的确定，每小时人体可以接受的最大内毒素剂量为（5EU?kg?h-1）×60=300EU?h-1（人平均体重按60kg计算）；而注射用头孢替唑人用每次最大剂量为4g，溶于5%葡萄糖注射液中2h滴注完毕，葡萄糖注射液的内毒素限量为0.5EU?mL-1，葡萄糖注射液按每1h200mL输入人体计算，则葡萄糖注射液带入的内毒素最大量为100EU?h-1；故注射用头孢替唑允许带入的内毒素最大限量为300-100=200EU?h-1。因为注射用头孢替唑每1h注入人体量为2000mg，所以注射用头孢替唑内毒素限量为0.1EU?mg-1。 　　2.2样品最大有效稀释浓度（cMVD） 以鲎试剂灵敏度0.5EU?mL-1为基准，以cMVD=λ/L=0.5/0.1=5.0mg?mL-1为样品的基准稀释浓度，用细菌内毒素检查用水以基准稀释浓度为起点，将样品往下倍比稀释，得样品的浓度系列溶液，即5.0，2.5，1.25，0.6，0.3mg?mL-1，记此系列溶液为NPC系列。PPC系列：将样品稀释成与上述NPC系列相同浓度系列，但在稀释过程中每一浓度样品都含有2λb内毒素。采用灵敏度λb=0.5EU?mL-1的鲎试剂分别与NPC和PPC2个系列的样品反应（37℃，60min）结果见图1。结果表明：样品浓度为1.25mg?mL-1以下时，不干扰实验进行。 　　3、干扰试验 　　选择样品实验浓度为1.25mg?mL-1，即内毒素限值为0.125EU?mL-1。其初筛试验结果如图1： 　　选取灵敏度λb=0.125EU?mL-1的鲎试剂，将样品用细菌内毒素检查用水稀释至浓度为1.25mg?mL-1做干扰试验。干扰试验按中国药典2000年版细菌内毒素检查法的供试品干扰试验项进行，实验结果见表2。结果表明：0.5λbλc2λb，故