第十二章DNA RNA 蛋白质课件.pptVIP

通过DEAE-纤维素将两种不同带电性的蛋白质分离开。图中显示的是带正电的离子交换树脂结合带负电的蛋白。 离子交换层析： 离子交换是利用蛋白质表面的电荷与层析剂上的离子基团的静电作用。 第十二章DNA、RNA和蛋白质 DNA的基本操作：DNA（线状双链DNA）、ocDNA（开环双链DNA）、cccDNA（闭环双链DNA）。 DNA是相当稳定的，但是使用时也不能太随意，DNA的污染来源主要是其他DNA分子。 DNA保存： DNA在中性PH，低温，暗处，合适的盐浓度和无物理剪切的条件下较稳定 ，适宜保存。用于存放DNA的缓冲液有三种,TE，0.1×TE(适宜酶促反应)，T50E （适宜溶解PH不稳定的DNA）。 DNA检测： 1.紫外吸收 2.溴化乙锭（EBa） DNA浓缩： 1. DNA不溶于乙醇，所以一般用乙醇沉淀DNA来达到纯化的目的; 2.异丙醇沉淀； 3.有机溶剂浓缩DNA，如正丁醇。 DNA纯化： 1. 酚抽提（适宜样品DNA中混有蛋白质污染）；2.苯酚/氯仿/异戊醇抽提; 3.DEAE/纤维素交换树脂(其他杂质); 4.凝胶过滤(适宜除去样品中含有盐、缓冲液组分、小分子杂质等)。 DNA篇 1. DNA的分离： 质粒DNA的提取基本步骤： 1）质粒载体的选择； 2）培养细菌使质粒扩增；3）收集和裂解细胞。溶菌酶破坏