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动物细胞培养和核移植技术
教学过程 教学内容 教学手段和方法 预期目标 引言
2、学习新课:
一、动物细胞培养
(1)动物细胞培养的定义
(2)动物细胞培养的过程
(3)动物细胞培养的条件
(4)动物细胞培养技术的应用
二、动物细胞核移植技术和克隆动物
1、核移植定义
2、体细胞核移植的过程
3、体细胞核移植技术的应用前景
4、体细胞核移植技术存在的问题
三、布置作业 师:前面,我们学习了植物细胞工程,今天,我们开始了解动物细胞工程。首先,请回顾:植物细胞工程有哪些基本技术?
生:植物组织培养,植物体细胞杂交。
师:那动物细胞工程又有哪些基本技术呢?
生:动物细胞培养,动物细胞位移植,动物细胞融合,生产系克隆等。
师:通过阅读你应注意哪些?
生:1.动物细胞培养与植物组织培养莫要混淆
2.动物细胞培养技术是动物细胞工程技术的基础。
师:请阅读材料,小组讨论解决方案
材料一:对于大面积烧伤的病人,自体健康皮肤非常有限,使用他人皮肤来源又不足,且会产生排斥反应。怎样才能获得大量的自体健康皮肤呢?
材料二:单细胞产生的蛋白质很少,怎样才能获得大量的分泌蛋白呢?
生:取相应细胞,大量培养,即通过动物细胞培养。
师:很好!对于细胞培养我们要了解两个问题。第一个问题:什么是动物细胞培养?
生:动物细胞培养是从动物机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后放在适宜的培养其中,让这些细胞生长和增殖。
师:第二个问题:怎样进行动物细胞培养?
生:首先,将组织分散成许多单个细胞
然后,用培养液培养
师:动物细胞,培养过程中应注意哪些地方?
生:1.用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理组织,使其分散成单个细胞。
2.培养皿或培养瓶的内表面光滑、灭毒,易于贴附,以促成细胞贴壁生长,防止细胞的接触抑制。
3.贴满瓶壁的细胞塞重新用胰蛋白酶等处理,便于分瓶继续培养。
师:进行动物细胞培养时用胰蛋白酶分散细胞,表明细胞的物质主要是什么成分?用胃蛋白酶行吗?
生:说明细胞间的物质主要是蛋白质。
不行,多数动物细胞培养适合的PH为7.2-7.4,而胃蛋白酶的作用的适合PH为2,PH大于6时,蛋白酶就会失去活性。胰蛋白酶的PH为7.6。
师:动物细胞培养过程中培养了几次?
生:两次,原代培养和传代培养。
师:
动物 剪碎 细胞 原代培养 细胞贴
细胞 胰蛋白酶处理 悬浮液 满瓶壁
胰蛋白酶处理 10~50 核型改变 获得
分瓶传代培养 代细胞 继续传代培养 不死性
师:目前使用的或冷冻保存的正常细胞通常为10代以内,以保持细胞正常的二倍体核型。
师:体外培养细胞时需要一定的营养和条件。下面,我们来具体了解。
师:为了使体外动物细胞培养顺利进行,应营造怎样的环境?
生:无菌、无毒的环境,培养液和所有培养具进行无菌处理。
师:动物细胞培养中,还不能出现培养基污染,那又该如何避免?
生:培养液中添加一定量的抗生素。
师:很好!细胞培养的过程中会产生代谢产物,其结果会对细胞自身造成危害,那又该怎样避免呢?
生:定期更换培养液。
师:植物组织培养的培养基中有哪些物质?
生:水、无水盐、植物激素等
师:那么,动物细细胞培养的培养液中含有哪些物质呢?
生1:糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量无素等。
生2:还有血清、血浆等。
师:上述营养物质按其种类和所需数量严格配制而成的培养基,称为合成培养基。
师:植物组织培养时需加入激素,而动物细胞培养中也需要激素,培养基中却未直接加入,其可能在哪种物质?
生:血清中。
师:据此来看添加血清,是否仅提供动物激素?
生:不是,还有蛋白质、氨基酸、葡萄糖等
师:很好,除此之外还需要适宜的温度和PH,以及气体环境,具体范围如何?
生:对哺乳动物而言,温度多以36.5±0.50C为宜,而PH多为7.2—7.4。
细胞培养所需气体主要有O2和CO2,O2是细胞代谢所需的,CO2主要维持培
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