中草药基原鉴定课件.pptVIP

中草藥基原鑑定 確保純正中草藥之供應、監控品質之工具 中草藥種類及來源眾多，易發生名稱混淆或品質不穩定 傳統鑑定方法 外觀性狀的觀察 易受栽培環境(地點、土壤、溫度、肥料…….) 加工產品的受限 DNA 分子鑑定技術 瞭解中草藥植物遺傳特性 選擇適當鑑定方法 主要原理為個體間之DNA 序列差異 PCR 增幅 RFLP ITS 及葉綠體DNA 細胞核內特定基因部分片段DNA 定序分析： ITS (internal transcribed spacer) DNA 序列分析 分析細胞核內18S 及28S rDNA 間之DNA 序列 植物屬間及種間此區域具有高度 序列變異性 目前中草藥基原鑑定常用工具之一 基原鑑定流程 NCBI 搜尋欲鑑定的物種5.8S rDNA序列 ↓ 選所需物種的5.8S rDNA，BLAST 比對分析 ↓ 上SDSC網站序列排比分析 ↓ 設計一對保留性引子 ↓ 抽取中草藥基因體DNA ↓ PCR 5.8S rDNA (大小約600～700 bp) * Berk et al. 2004 Berk et al. 2004 ↓ 割膠回收PCR產物 ↓ 與T-vector接合，轉形到大腸桿菌 ↓ 藍白篩選，挑選白色菌落四區畫線 ↓ 抽取plasmid，以限制酶EcoRI切割確認 ↓ 送生技公司定序 ↓ NCBI BLAST比對分析 ↓ SDSC 序列排比做出演化樹圖形