第04章标记物及其与抗原抗体的结合物制备课稿.ppt

第七节 稀土离子与抗原抗体的结合物制备 一、基本方法 镧系元素离子不能直接与抗原或抗体分子结合，需利用具有双功能基团的螯合剂。 常用的双功能螯合剂有1-（对-苯偶氮）-EDTA、异硫氰酸苯基-EDTA、异硫氰酸苯甲基-EDTA和二乙烯三胺五乙酸（DTPA）等。 螯合剂可先螯合EU3+，再连接蛋白质（一步法），或先连接蛋白质，再螯合EU3+(二步法)。针对小分子半抗原，则需先将半抗原与大分子载体蛋白（牛血清白蛋白、多聚赖氨酸等）连接，再标记EU3+。 第八节 量子点与抗原抗体结合物制备 一、基本方法 量子点与抗原、抗体等生物分子偶联的方法主要有静电吸附法、生物素-亲和素法及共价结合法。 共价结合法亦称双功能交联试剂法，通过化学反应将量子点表面进行羧基、氨基、羟基或环氧基等活性基团修饰改性，使之能与生物分子共价偶联。 量子点表面含有羧基的偶联方法主要是混合酸酐法和碳二亚胺法。 含有氨基的偶联方法主要是戊二醛法。 表面功能基团为羟基的量子点偶联主要通过琥珀酸酐法实现。 二、量子点标记结合物的纯化 纯化目的主要是：除去多余的交联剂、未交联的抗体以及未结合的量子点。 多余的抗体可采用凝胶柱层析法或50%饱和硫酸铵沉淀提纯法去除。 溶液中未反应的小分子，如偶联剂、抗体、量子点分解产物等可采用透析法去除。 不同偶联比例量子点探针的分离，可根据颗粒大小不同，其进一步纯化可以采用凝胶过滤法、高效液