I型内皮素受体反义寡聚核苷酸抑制VSMC增殖及内膜增生.docVIP

I型内皮素受体反义寡聚核苷酸抑制VSMC增殖及内膜增生 作者：钱济先 ，张柏根 ，李桂云 ，张岚，邓廉夫，朱雅萍 【关键词】 内皮素 关键词: 内皮素;反义寡核苷酸;血管平滑肌细胞 摘 要:目的 观察Ⅰ型内皮素受体反义寡核苷酸对血管平滑肌细胞增殖和内膜增生的抑制作用. 方法 ①细胞培养:取家兔主动脉中膜消化后培养传代，经抗α-actin鉴定后使用第4～6代传代细胞;②人工合成ODN:经Genbank检索筛选，合成含18bp ETA-ODN片段，再对5端硫代修饰以增加稳定性，同时行地高辛标记以检测反义片段的细胞膜穿透性;③MTT分光光度法检测ETA-ODN对VSMC增殖的抑制作用;④运用放射受体结合分析法了解ODN对ETA蛋白表达的抑制作用，以探讨其反义作用;⑤兔颈动脉空气干燥模型在体研究ODN对血管内膜增生的抑制作用:应用F-127凝胶载体携带ETA-ODN导入血管周围，术后不同时间观察增生内膜相对厚度. 结果 ODN于培养后12h进入细胞内，并逐渐增加;15μmol L-1 ETA-ODN对VSMC增殖具有抑制作用，24h后即有显著作用;ETA-ODN对ETA表达亦有明显的抑制作用，表现为CPM于24h逐渐减少;ETA-ODN导入后，血管增生