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第 五 章核酸化学 化学化工院：冉秀芝 本章教学目的要求 1.掌握： （1）DNA的二级结构特点 （2） mRNA和 tRNA的结构特征及主要功能 2熟悉： （1）DNA的三级结构：核小体的结构特点 （2）DNA的理化性质及其与结构的关系 3.了解： （1）核苷酸的分子构成、连接方式及书写方式； （2）核酸酶 本章重点及难点 第一节 概 述 染色体、基因和DNA 核酸的化学组成 一、染色体、基因和DNA 染色体和基因——遗传的基本单位 核酸——遗传信息的载体 ※如何证明核酸是遗传物质的载体？ １９４４年O.T.Avery的细菌转化实验是获得DNA携带遗传信息的第一个证明； １９５２年Alfred D.和Hershey等人建立的T2噬菌体捣碎的实验，这是第二个证据，证明噬菌体复制的物质是DNA而不是蛋白质外壳； 1953年 Watson和Crick的DNA双螺旋模型的发现，更进一步揭示了DNA作为遗传物质储存和信息传递的化学机制； 核酶的发现，一些核酸本身具有酶催化的活性。 1944年，Avery的转换转化实验 5. 核苷酸的衍生物 含核苷酸的生物活性物质： NAD+、NADP+、CoA-SH、FAD 等都含有 AMP 6.核苷酸的重要作用 核苷酸是合成DNA和RNA的前体； UDPG、CDP-甘油二酯、 S-腺苷甲硫氨酸参与多糖、磷脂和卵磷脂的生物合成 ATP是生物体内生物能生成、储藏、转运的中心； 各种代谢反应中所需的NADH、HSCoA、FAD、都是腺苷酸的衍生物 cAMP在生物体内具有传递信息的作用 GTP是生物大分子移位反应的主要动力来源 第二节 核酸的结构 一、核酸的一级结构 定义 核酸的一级结构是指核苷酸的排列顺序，包括核苷酸之间的连接键。 由于核苷酸间的差异主要是碱基不同，所以也称为碱基序列。 多聚核苷酸的结构特征 主链是相间出现的磷酸戊糖残基通过共价键连接； 各种碱基排在主链外侧； 磷酸二酯键在主链中取向相同从5′→3′； 线性结构有3′和5′末端，即在3′位置上缺乏核苷酸残基，5′末端即在5′位置上缺乏核苷酸残基。3′端有游离的羟基，5′端有游离的磷酸基。 2.一级结构——核苷酸的排列顺序 二、核酸的高级结构 DNA的二级结构——双螺旋结构模型 tRNA二级结构——三叶草结构模型 DNA的三级结构——超螺旋 （3）DNA双螺旋结构的稳定因素 氢键维持双链横向稳定性， 碱基堆积力使双螺旋内部形成疏水区域，利于碱基间形成氢键，是维持DNA双螺旋稳定的主要因素。 离子键能减少双键间的静电排斥，有利于双螺旋稳定。 DNA的变性过程 热变性 解链曲线：如果在连续加热DNA的过程中以温度对A260（absorbance，A，A260代表溶液在260nm处的吸光率）值作图，所得的曲线称为解链曲线。 DNA的熔解温度(Tm) 定义：在熔解曲线中，当A260达到最大值一半时，所对应的温度。 影响Tm的因素 DNA的均一性 介质中的离子强度 G、C的含量 ※DNA的Tm值与分子中的G和C的含量有关，经验公式计算： （G+C)%=(Tm-69.3)X2.44 DNA碱基序列测定方法 测定的基本步骤 链终止法（Sanger–Coulson方法） DNA的化学降解法（Maxam-Gilbert） 自动DNA测序 RNA碱基序列测定的方法 第四节 核酸的生物功能 二、RNA是生物遗传信息表达的媒介1.基因的转录—— mRNA的合成 mRNA的结构特点: 真核细胞mRNA的3’-末端有一段长达200个核苷酸左右的聚腺苷酸(polyA)，称为尾结构。 （参与mRNA从细胞核到细胞质的转移；与其半寿期有关。） 5’ -末端有一个甲基化的鸟苷酸，称为帽结构。 （与翻译与mRNA的稳定有关。） 2. tRNA和rRNA的功能 tRNA功能：将mRNA携带的遗传信息翻译成氨基酸的信息，并将相应的氨基酸活化后，带到核糖体上进行蛋白质的生物合成。 rRNA功能：是构成核糖体的主要组成成分，在蛋白质合成中起重要的作用。 三、生物遗传变异的化学本质——DNA的结构变化 ※生物遗传变异的分子机制是DNA分子中为氨基酸编码的三联体密码的改变。 四、核酸的催化性质——核酶 1.核酶的组成和结构 2.核酶的催化作用 3.核酶的研究现状与展望 第五节 核酸化学中的几种重要技术 杂交的种类 Southern 杂交（Southern bolting） 用于检测DNA Northern 杂交（Northern bolting） 用于检测RNA Western 杂交 （Western bolting）