5.分子发光分析法课件.pptVIP

紫外-可见分光光度计测量池(吸收池) 空间位阻对荧光发射的影响 3）取代基的位置 反式二苯乙烯 强荧光物质 ?F=0.75 ?F=0.03 立体异构体对荧光发射的影响 顺式二苯乙烯 非荧光物质 电离效应对荧光发射的影响 OH- H+ OH- H+ pH=1, 有荧光 pH=13, 无荧光 无荧光 有荧光 含有重原子的溶剂，由于重原子效应荧光减弱、磷光增强。 5.重原子取代基效应 —Cl， — Br ， —I S1 →T1的系间窜跃由于重原子的存在增强 1-碘萘 1-溴萘 1-氯萘 1-氟萘 1-甲基萘 萘 化合物 ~ 320 319 316 318 315 λ Fmax(nm) 488 484 483 473 476 470 λ Pmax (nm) 1000 6.4 5.2 0.068 0.053 0.093 ?P/?F 0.0023 0.014 0.23 1.4 2.5 2.6 τ p(s) 6、环境因素对荧光的影响： （1）溶剂的极性：电子激发态比基态的极性大，溶剂的极性增强，荧光强度增大，荧光波长红移。 0.002 390 2.24 四氯化碳 0.041 398 5.2 氯仿 0.055 405 21.5 丙酮 0.064 410 38.8 乙腈 荧光效率 荧光峰l/nm 相对介电常数 溶剂 巯基喹啉在不同溶剂中的荧光峰和荧光效率 （2）温度：温度升高，Kf不变，但非辐射跃迁的速率常数增大，是故荧光效率降低。 （3）pH值：含酸性或碱性取代基的化合物荧光性质受pH的影响。 如： 无荧光 蓝色荧光 再如： 无荧光 蓝色荧光 （4）表面活性剂：有利于荧光发射。 （5）O2的存在：O2为顺磁性分子，溶液中溶解氧的存在，常常导致荧光降低，甚至熄灭，这可能是处于单重激发态的荧光物质的分子相互作用，加速系间窜跃（几率增大）所致。 六. 分子荧光(磷光)强度与荧光物质浓度的关系 1. 荧光强度(磷光)与浓度的关系 光吸收定律（Lambert – Beer Law） 相应的吸光分数为： 荧光强度（IF）与相应的吸光分数成正比： 按照级数展开式： 对于稀溶液，当? bc0.05（磷光? bc0.01）时： IF----荧光强度 ?F-----荧光量子产率 k--与仪器灵敏度有关的参数 I0--入射光强度。 IP----磷光强度 ?P-----磷光量子产率 b--吸收光程 ?--摩尔吸光系数 C--荧光物质浓度 但在高浓度时，If ＝ KC不成立 If C 原因： （1）高次项 （2）自熄灭现象，自吸收现象 七、 荧光光谱仪 （一）. 主要组成及部件的功能 荧光分光光度计工作原理基及仪器结构框图 光源 氙灯 激发单色器 样品池 光电倍增管 数据处理 仪器控制 光源 样品池 激发 单色器 检测器 数据处理 仪器控制 发射 单色器 发射单色器 问题：荧光分光光度计与紫外-可见分光光度计有何异同点？ （二）. 光源 1. 光源的要求： 发射强度足够且稳定的连续光谱 光辐射强度随波长的变化小 有足够长的使用寿命 2.氙灯光源 常用气体放电灯类型： 氙灯光源 高压汞光源 波长范围：200~1000nm 工作压力：5~20 atm 启动电压：20~40KV 使用寿命：1000~2000h 最广泛应用的连续光源： 发射波长范围宽 发射光强度大 3. 高压汞灯光源 应用广泛的线光源： 253.7 296.5 302.2 312.6 313.2 365.0 365.5 366.3 404.7 435.8 546.1 557.0 579.0 (nm ) 光源 样品池 激发 滤光片 检测器 数据处理 仪器控制 发射 单色器 光源 样品池 激发 滤光片 检测器 数据处理 仪器控制 发射 滤光片 （三）. 单色器 平面衍射光栅 线色散率 聚光本领 分辨率 （四）. 检测器 光电倍增管 放大倍数：2n~5n;n=10,103~107， 最大108~109 （五）.样品池：液池、荧光池 1.样品池的材料：与紫外-可见分光光度计的吸收池一样 2. 吸收池的形状：紫外-可见分光光度计的吸收池两面透光 荧光分光光度计的样品池四面透光 波长范围 3. 使用注意事项 容易破碎 问题：紫外-可见分光光度计的吸收池与荧光分光光度计的样品池有什么区别？ 沾污问题 闪跃特性 在紫外光照射下会发生荧光的无机化合物很少，主要依赖于有机试剂形成的螯合物。 八. 荧光分析的应用 1. 无机化合物 直接荧光测定法 其中，较常测定的元素有：Be、Al、B、Ga、Se、Mg、Zn、Cd与某些稀土元素；测定的灵敏度有些可以达到10-10