第02章蛋白质的结构与功能课件.ppt

蛋白质的结构与功能 什么是蛋白质? 蛋白质(protein)是由许多氨基酸(amino acids)构成的具有特定空间结构的高分子有机物。 蛋白质在生命活动中的重要作用 生物催化作用 免疫保护作用 运动与支持作用 运输和储存作用 代谢调节作用 控制生长和分化 接收和传递信息 蛋白质的分子组成The Molecular Component of Protein 组成蛋白质的元素 主要有C、H、O、N和 S。 有些蛋白质含有少量磷或金属元素铁、铜、锌、锰、钴、钼，个别蛋白质还含有碘 。 蛋白质元素组成的特点 由于体内的含氮物质以蛋白质为主，因此，只要测定生物样品中的含氮量，就可以根据以下公式推算出蛋白质的大致含量： 三聚氰胺事件 一、氨基酸 存在自然界中的氨基酸有300余种，但组成人体蛋白质的氨基酸仅有20种，且均属 L-?-氨基酸 （甘氨酸除外）。 氨基酸的共同特点： （1）两性电解质 （2）除甘氨酸外都是L 型氨基酸 （3）侧链R基团结构和性质不同 2.营养学分类 必需氨基酸：赖、色、苯丙、甲硫、苏、亮、 异亮、缬 非必需氨基酸：12种 3. 根据氨基酸结构分类 （1）脂肪族氨基酸：甘、丙、丝、苏、半胱、甲硫、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬、谷、精、赖。 （2）支链氨基酸：缬、亮、异亮。 （3）芳香族氨基酸：苯丙、酪、色。 （4）杂环氨基酸：组、色。 （5）杂环亚氨基酸：脯 二、肽 （二）生物活性肽 1. 谷胱甘肽(glutathione, GSH) 蛋白质的分子结构The Molecular Structure of Protein 二、蛋白质的空间结构 蛋白质构象又分为主链构象和侧链构象，主链构象指多肽链上各原子的排布及相互关系；侧链构象是指各氨基酸侧链基团中原子的排布及彼此关系。 主链构象决定侧链基团的排布，侧链构象影响主链构象的卷曲和折叠，二者相互依存，相互影响。 蛋白质二级结构是以一级结构为基础的。一段肽链其氨基酸残基的侧链适合形成?-螺旋或β-折叠，它就会出现相应的二级结构。 主要的化学键(次级键): 氢键 离子键 疏水相互作用 又称疏水键，是稳定三级结构最主要的作用力 范德华力 二硫键（共价键） 分子伴侣(molecular chaperon) 1. 防止新生肽链的错误折叠和聚合 2. 肽链快速折叠成正确的维构型并成熟为具有完整结构和功能的蛋白质 HSP (heat shock protein) （二）蛋白质的空间构象变化与功能 蛋白质分子可与某些小分子物质相互作用，致使构象发生轻微的改变，生物学效应随之发生较大的改变。这种作用称为变构作用或别构效应。 Hb与Mb一样能可逆地与O2结合， Hb与O2结合后称为氧合Hb。氧合Hb占总Hb的百分数（称百分饱和度）随O2浓度变化而改变。 协同效应(cooperativity) 一个寡聚体蛋白质的一个亚基与其配体结合后，能影响此寡聚体中另一个亚基与配体结合能力的现象，称为协同效应。 如果是促进作用则称为正协同效应 (positive cooperativity) 如果是抑制作用则称为负协同效应 (negative cooperativity) 变构效应(allosteric effect) 蛋白质空间结构的改变伴随其功能的变化，称为变构效应。 库鲁病(kuru) （四）蛋白质的呈色反应 1. 茚三酮反应 2. 双缩脲反应 蛋白质和多肽分子中肽键在稀碱溶液中与硫酸铜共热，呈现紫色或红色，此反应称为双缩脲反应，双缩脲反应可用来检测蛋白质水解程度。 3．酚试剂反应 蛋白质分子中酪氨酸的酚基与酚试剂作用，生成蓝色络合物,该蓝色物质在650nm下有强吸收。在一定范围内，蛋白质浓度与A650光吸收成正相关，因此可以用来进行蛋白质定量 （五）蛋白质的紫外吸收光谱特性 蛋白质分子中酪氨酸、色氨酸等芳香族氨基酸含有共轭双键，在280nm紫外光谱处，有特征性的最大吸收峰。 280nm的吸收值常用于蛋白质的定量测定。蛋白质浓度估算公式 C=1.45×A280－0.74×A260来。 三、多肽链中氨基酸序列分析 1．测序前的准备工作 测定蛋白质的氨基酸组成 2．多肽链氨基末端与羧基末端分析 3．多肽链的氨基酸序列测定和重叠组合 四、蛋白质空间结构测定 测定晶体中的蛋白质分子构象可采用经典的X线晶体衍射法和中子衍射法。 溶液中的蛋白质分子构象的测定，常采用磁共振法、圆二色性光谱法、激光拉曼光谱法、荧光光谱法等 。 第五节 蛋白质的分类 3. 凝胶过滤层析