2 第二章纯培养课件.ppt

二、用固体培养基分离纯培养 4、厌氧微生物的分离 厌氧罐 厌氧手套箱 二、用固体培养基分离纯培养 4、厌氧微生物的分离 稀释摇管法 三、用液体培养基分离纯培养 稀释法进行液体分离必须在同一个稀释度的许多平行试管中，大多数（一般应超过95%）表现为不生长。 1878年，Lister 分离乳酸链球菌时所使用的微量注射器和酒杯培养装置,注射器的最小吸取量： 0.00062 毫升 四、单细胞（孢子）分离 一般采用显微操作仪，在显微镜下进行； 操作难度与细胞或个体的大小成反比； 五、选择培养分离 抑制大多数其它微生物的生长； 使待分离的微生物生长更快； 使待分离的微生物在群落中的数量上升， 方便用稀释法对其进行纯化。 微生物群落中数量占少数的微生物的分离纯化： （没有一种培养基或一种培养条件能够满足自然界中一切生物 生长的要求，在一定程度上所有的培养基都是选择性的。） 使待分离的微生物生长“突出”； 直接挑取待分离的微生物的菌落获得纯培养。 五、选择培养分离 1. 利用选择平板进行直接分离 待分离的微生物生长，其它微生物的生长被抑制 高温下培养：分离嗜热细菌； 培养基中不含N：分离固氮菌； 培养基加抗生素：分离抗性菌； 五、选择培养分离 1. 利用选择平板进行直接分离 待分离的微生物的生长特征明显不同于其它微生物 颜色反应：分离特定的菌株； 牛奶平板：分离蛋白酶产生菌； 利用特定细菌的滑动特点进行 分离纯化； 五、选择培养分离 2. 富集培养 从自然界中分离到所需的特定微生物 特定的环境条件 仅适应于该条件的微生物旺盛生长 待分离微生物在群落中的数量大大增加 2. 富集培养 富集培养是微生物学家最强有力的技术手段之一。营养和生理 条件的几乎无穷尽的组合形式可应用于从自然界选择出特定微 生物的需要。 根据微生物的特殊要求，从自然界分离出特定已知微生物种类； 分离培养在特定环境中能生长的微生物； 六、二元培养物 培养物中只含有二种微生物，而且是有意识的 保持二者之间的特定关系的培养物称为二元培养物。 病毒和宿主细胞； 纤毛虫、变形虫和粘细菌； 微生物学实验室的常规操作程序 六、 菌种保藏 性状稳定的菌种是微生物学工作最重要的基本要求，否则 生产或科研都无法正常进行。 影响微生物菌种稳定性的因素： a）变异； b）污染； c）死亡； 不衰 不乱 不死 1、菌种的衰退与复壮 菌种衰退： 菌种在培养或保藏过程中，由于自发突变的存在，出现某些原有优良生产性状的劣化、遗传标记的丢失等现象，称为菌种的衰退。 衰退原因： ①基因突变，②分离现象。 衰退现象： 菌落和细胞形态的改变； 生长速度缓慢，产孢子越来越少； 抵抗力、抗不良环境能力减弱等。 代谢产物生产能力或其对宿主寄生能力下降； 防止衰退的措施： 1）减少传代次数； 2）创造良好的培养条件； 3）经常进行纯种分离，并对相应的性状指标进行检查； 4）采用有效的菌种保藏方法； 1）从衰退的菌种群体中把少数个体再找出来，重新获得具有 原有典型性状的菌种。 2）有意识地利用微生物会发生自发突变的特性，在日常的菌种 维护工作中不断筛选“正变”个体。 菌种的复壮： a）纯种分离； b）通过寄主体进行复壮； c）淘汰已衰退的个体 菌种保藏机构的任务：广泛收集科研和生产菌种、菌株，并加以妥善保管，使之达到不死、不衰、不乱以及便于研究、交换和使用的目的。 菌种保藏机构： 中国微生物菌种保藏委员会(CCCCM) 美国的典型菌种保藏中心(ATCC) 英国国家典型菌种保藏所（NCTC） 法国里昂巴斯德研究所（IPL） 国内外菌种保藏机构： 2、菌种保藏 基本方法： 生活态 （传代） 休眠态 培养基传代培养 寄主传代培养 冷冻 干燥 斜面、平板 液氮、低温冰箱 沙土管、冷冻真空干燥 原理：选用优良的纯种，（最好是休眠体，如分生孢子、芽胞等），创造降低微生物代谢活动强度，生长繁殖受抑制，难以发生突变的环境条件。（其环境要素是干燥、低温、缺氧、缺营养 以及添加保护剂等） 1）低温保藏法方法：菌种管置4℃冰箱保藏，定时传代 原理：低温下，微生物代谢强度明显下降 。2）石蜡油低温保藏法橡皮塞取代棉塞、加石蜡油。 3）悬液保藏法 1）真空冷冻干燥法 加有保护剂的菌悬液在冻结状态下予以真空干燥。适用于各种微生物， 便于大量保藏，菌种存活时间长，是目前最好的保藏方法。 2）砂土管法 适用于放线菌、芽孢菌和某些真菌保藏， 保藏时间几至几十年。 传代培养保藏 1）液氮超低温保藏法 将菌种置于保护剂中，预冻后保存在液氮超低温冰箱中 （ -196℃）