HPLC―ELSD测定乌贝益胃胶囊中贝母素甲和贝母素乙含量.docVIP

HPLC―ELSD测定乌贝益胃胶囊中贝母素甲和贝母素乙含量 　　摘要：目的 建立高效液相色谱-蒸发光散射检测器法（HPLC-ELSD）同时测定乌贝益胃胶囊中贝母素甲和贝母素乙含量的方法，并对10批样品进行考察，制定含量限度。方法 采用HPLC-ELSD，色谱柱为Eclipse XDB C18（150 mm×4.6 mm，5 ?m），流动相为乙腈-水-二乙胺（65∶35∶0.05），柱温为30 ℃，流速为1.0 mL/min。ELSD参数：漂移管温度为80 ℃，载气流速为2.5 L/min。结果 贝母素甲和贝母素乙进样量分别在0.294～2.944 ?g、0.424～4.240 ?g范围内与各自峰面积的对数值呈线性关系，平均加样回收率分别为98.13%（RSD=1.02%，n=6）、98.38%（RSD=0.92%，n=6）。结论 本方法准确可靠，重复性好，为乌贝益胃胶囊质量标准的制定提供了依据。 　　关键词：高效液相色谱-蒸发光散射检测器；乌贝益胃胶囊；贝母素甲；贝母素乙；含量测定 　　DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2013.03.022 　　中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2013）03-0057-03 　　乌贝益胃胶囊是本院在乌贝散的基础上创制而成的医院制剂，由海螵蛸、浙贝母、白及、酒大黄、黄连、三七、吴茱萸7味中药组成，具有抑酸止痛、养胃止血的功效，临床上主要用于胃酸过多、胃及十二指肠溃疡伴出血、糜烂性胃炎以及各种原因所致的胃出血等症。浙贝母作为君药，其主要活性成分贝母素甲和贝母素乙具有镇痛抗炎、促进溃疡愈合的作用[1-2]，与乌贝益胃胶囊的主要药理作用相吻合，所以，有必要对其中的主要生物碱贝母素甲和贝母素乙进行含量控制，从而控制药品质量，保证疗效。由于贝母素甲和贝母素乙为异甾体生物碱，缺少发色团，用紫外吸收检测器无法检测到，所以，一般采用薄层扫描法[3]、柱前衍生化法[4]、气相色谱法[5]。也有文献报道采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器法（HPLC-ELSD）测定贝母素甲和贝母素乙的含量[6-7]。为确保产品质量，本试验采用HPLC-ELSD测定乌贝益胃胶囊中这两种生物碱的含量。现报道如下。 　　1 仪器与试药 　　Agilent1100型HPLC仪，包括G1311A四元泵、G1316A柱温箱（美国Agilent公司）；UM3000蒸发光散射检测器（上海通微分析仪器有限公司）；Metler-D2025型十万分之一电子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；AS3120A型超声波清洗器（天津奥特赛恩斯仪器有限公司）。 　　贝母素甲对照品（批号110750-200608）、贝母素乙对照品（批号110751-200709）均由中国药品生物制品检定所提供；乙腈、甲醇（色谱纯，山东禹王实业有限责任公司）；水为娃哈哈纯净水，其余试剂均为分析纯。乌贝益胃胶囊10批（本院自制）。 　　2 方法与结果 　　2.1 色谱条件 　　色谱柱：Eclipse XDB C18（150 mm×4.6 mm，5 ?m）；流动相：乙腈-水-二乙胺（65∶35∶0.05）；流速：1.0 mL/min；柱温：30 ℃。ELSD参数：漂移管温度为80 ℃，载气流速为2.5 L/min。在此条件下，样品中的其他物质对含量测定无干扰。色谱图见图1。 　　2.2 对照品溶液的制备 　　分别精密称取贝母素甲对照品3.68 mg、贝母素乙对照品5.30 mg，置于25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得每1 mL含147.2 ?g贝母素甲、212.0 ?g贝母素乙的混合对照品溶液。 　　2.3 供试品溶液的制备 　　精密称取本品内容物约10 g，置具塞锥形瓶中，加氨水15 mL浸润30 min，再加氯仿超声处理2次（频率40 kHz，功率250 W），每次50 mL，时间30 min，滤过，用氯仿10 mL洗涤药渣，合并氯仿液，回收氯仿至干，残渣加pH为1的盐酸水溶液20 mL溶解并转移至分液漏斗中，残渣再加氯仿20 mL溶解并转移至同一分液漏斗中，分取水层，氯仿层再用pH为1的盐酸水溶液提取2次，每次20 mL，弃去氯仿层，合并3次水提液，加氨水至pH 11，再用氯仿提取4次，每次20 mL，合并氯仿层，回收氯仿至干，残渣用甲醇溶解并转移至5 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45 ?m）滤过，即得。 　　2.4 阴性对照溶液的制备 　　按处方制备工艺制成缺浙贝母的阴性样品，按“2.3”项下方法制备阴性对照溶液。 　　2.5 线性关系考察 　　精密吸取上述对照品溶液2.0、5.0、10.0、15.0、20.0 ?L，按上述色谱条件