HPLC测定舒通安泰胶囊中大黄素和大黄酚的含量.docVIP

HPLC测定舒通安泰胶囊中大黄素和大黄酚的含量 　　摘要：目的 建立舒通安泰胶囊中大黄素、大黄酚的高效液相色谱测定方法。方法 采用高效液相色谱法测定大黄素、大黄酚的含量，色谱柱为Thermo C18柱（5 ?m，4.0 mm×250 mm），流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液（85∶15），检测波长为254 nm，流速1.0 mL/min，柱温30 ℃。结果 大黄素的进样量在0.016～0.080 ?g之间时，进样量与峰面积积分值之间呈良好线性关系，r=0.999 6。大黄酚的进样量在0.032～0.160 ?g时，进样量与峰面积积分值之间呈良好线性关系，r=0.999 8。结论 本测定方法简便、准确、重复性好，可用于舒通安泰胶囊的质量控制。 　　关键词：舒通安泰胶囊；高效液相色谱法；大黄素；大黄酚；含量测定 　　DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2013.11.023 　　中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2013）11-0061-02 　　舒通安泰胶囊是酒泉市中医医院院内制剂（批准文号：甘药制字。该处方以大黄为君药清热毒、荡邪滞、行瘀血，以黄连为臣药清热祛火，以当归、三七为佐使药活血化瘀、润肠通便。诸药合用，共奏清热泻火、活血化瘀、润肠通便之功效，治疗便秘疗效显著。为有效控制该制剂质量，我们采用高效液相色谱法（HPLC）对舒通安泰胶囊中大黄素、大黄酚进行了含量测定。 　　1 仪器与试药 　　LC-20A高效液相色谱仪（日本岛津公司），紫外检测器；AE-240电子分析天平（Mettler Toledo）；KH-250DB型超声波清洗器（昆山禾创超声仪器有限公司）。 　　大黄素对照品（中国药品生物制品检定所，批号110756- 200110），大黄酚对照品（中国药品生物制品检定所，批号110796-200716），舒通安泰胶囊样品（酒泉市中医院自制，批20090502，甲醇为色谱纯（山东禹王实业有限公司化工分公司，批号20100722271），水为重蒸水，其他试剂均为分析纯。 　　2 方法与结果 　　2.1 色谱条件 　　用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-0.1%磷酸溶液（85∶15）为流动相，检测波长为254 nm，流速为1.0 mL/min，柱温30 ℃。理论板数按大黄素峰计算应不低于4000。 　　2.2 溶液的制备 　　2.2.1 对照品溶液的制备 取经五氧化二磷减压干燥至恒重的大黄素和大黄酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL分别含大黄素8 ?g、大黄酚16 ?g的溶液，作为对照品溶液。 　　2.2.2 供试品溶液的制备 取本品20粒的内容物，混匀，研细，取约1 g，精密称定，加甲醇25 mL加热回流提取40 min，滤过，残渣用10 mL甲醇分2次洗涤，合并甲醇液，置50 mL圆底烧瓶中，挥去甲醇，残渣加10%的盐酸溶液10 mL，超声提取（功率220 W，频率50 kHz）5 min，加氯仿10 mL，回流提取1 h，分取氯仿层，酸液用8 mL氯仿提取2次，合并氯仿液，用无水硫酸钠脱水，挥去氯仿，残渣加甲醇溶解并稀释至25 mL，摇匀，作为供试品溶液。 　　2.2.3 阴性对照溶液的制备 按处方比例称取除大黄外的其余药材，按工艺方法制备阴性样品，按“2.2.2”项下方法制成阴性对照溶液。 　　2.3 系统适用性试验 　　按“2.1”项下色谱条件，分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照品溶液各取10 ?L进样。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，有一相同保留时间的色谱峰，阴性对照在此保留时间无干扰。见图1。 　　2.4 线性关系考察 　　分别精密吸取对照品溶液各2、4、6、8、10 ?L，在上述色谱条件下进样测定，记录色谱图及峰面积积分值。以峰面积积分值为纵坐标，以进样量为横坐标，分别计算大黄素与大黄酚的回归方程。结果表明，大黄素的进样量在0.016～0.080 ?g之间时，进样量与峰面积积分值之间呈良好线性关系，r=0.999 6。大黄酚的进样量在0.032～0.160 ?g时，进样量与峰面积积分值之间呈良好线性关系，r=0.999 8。 　　2.5 稳定性试验 　　精密量取供试品溶液10 ?L，在上述色谱条件下进样测定，每隔一定时间（0、3、6、9、12 h）进样测定1次，记录色谱图及峰面积积分值，结果大黄素RSD=2.40%，大黄酚RSD=2.76%。表明供试品溶液在12 h内稳定。 　　2.6 精密度试验 　　精密吸取对照品溶液10 ?L，在上述色谱条件下连续进样5次，记录峰面积积分值，计算，结果大黄素与大黄酚RSD