探讨干预小鼠急性酒精性肝损伤细胞凋亡的时间窗.docVIP

探讨干预小鼠急性酒精性肝损伤细胞凋亡的时间窗 　　DOI：10.3760/cma.j.issn.1671-0282.2014.04.009 　　作者单位：100050 北京，首都医科大学北京友谊医院急诊科 　　通信作者：杨立沛，Email： ylp8499@139.com 　　【摘要】目的 建立小鼠急性酒精性肝损伤的模型，通过测定肝脏组织内的相关增殖凋亡蛋白的变化，探讨抑制其细胞凋亡的治疗时间窗，以指导临床治疗肝损伤。方法 将30只雄性KM种小鼠饲养于首都医科大学清洁级动物房，随机分为两组（随机数字法）。对照组10只给予正常喂养，实验组20只，一次性给予50%乙醇（12 mL/kg）灌胃，分别在灌胃6 h（m 6 h）和12 h（m12 h）两个时间点处死小鼠各10只。苏木素-伊红（HE）染色法观察小鼠肝脏组织病理学的变化。应用Western-blot的方法监测小鼠肝脏中蛋白T-ERK，P-ERK，PKC，P-PKC，caspase-3的含量变化。用SPSS 11.5统计软件对数据进行处理，进行方差分析，以P0.05为差异具有统计学意义。结果 通过观察小鼠灌酒后的行为变化，结合形态学指标验证小鼠急性酒精性肝损伤的模型复制成功，小鼠无死亡，实验组小鼠出现嗜睡、行动迟缓等醉酒状态。实验组经酒精灌胃6 h所测指标较对照组没有统计学意义，而经酒精灌胃12 h，肝小叶结构紊乱，肝细胞内脂肪空泡形成，与对照组比较，P-ERK和P-PKC显著降低[（2.41±0.38） ，（0.97±0.25），F=4.82，P0.05；（0.16±0.00） ， （0.08±0.01），F=29.63，P0.05]，caspase-3显著升高[（0.30±0.02 ）， （0.11±0.01），F=34.38，P0.05]。结论 给予小鼠大剂量酒精灌胃后，凋亡主要集中在12 h出现，因此抑制小鼠急性酒精性肝损伤细胞凋亡的时间窗可能存在于6～12 h之间。 　　【关键词】小鼠；急性酒精性肝损伤；凋亡；增殖；T-ERK；P-ERK；蛋白激酶C；P-PKC；caspase-3 　　Study on the intervention time windows of cell apoptosis in acute liver injury in mice Wei Hongtao， Xue Xiaowei，Liu Bing，Yang Lipei， Wang Li. Department of Emergency， Beijing Friendship Hospital Affiliated to Capital Medical University， Beijing 100050，China 　　Correspondence author：Yang Lipei， Email： ylp8499@139.com 　　【Abstract】Objective To study the proliferation and apoptosis of related proteins in pathological liver tissues of alcohol-induced mice， and establish a model and time-evolution rule of liver cell apoptosis， which can be used to guide the clinical treatment of acute alcoholic liver injury. Methods A total of 30 male KM mice were fed in a clean grade animal room at the Capital Medical University and then randomly （random number） separated into two groups. The 10 mice in the normal group were fed without ethanol， while the other 20 mice in the experimental group were given a one-time grant of 50% ethanol （12 mL/kg） by gavage. The mice in the experimental group were killed at two time points， 6 h for 10 mice and 12 h for the other 10， after the intragastric administration.