依博素生物合成基因ste15的克隆表达及酶学性质研究..docVIP

依博素生物合成基因ste15的克隆表达及酶学性质研究 李晓华 李 元 (中国医学科学院中国协和医科大学医药生物技术研究所北京 100050) 摘 要： ste15的酶学性质。方法 将ste15基因克隆至质粒pET30a，在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达SDS结果显示在大约50kD处出现了一条新的蛋白条带，与推测值相符。Ste15蛋白在E.coli中以可溶和包涵体两种形式表达，二者各占50％镍亲和柱层析纯化。Stel5蛋白是葡萄糖糖基转移酶，负责依博素中葡萄糖多糖重复单元增长链的转移。 关键词：链霉菌，表达，依博素生物合成糖基转移酶(Streptomyces. sp.139)产生的可能用于治疗类风湿性关节炎的I类新药，正在申报临床[1]。依博素由葡萄糖、半乳糖、甘露糖、鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、岩藻糖和半乳糖糖醛酸共8种单糖组成[2]。依博素生物合成基因簇ste已被，其中ste15基因的大小为1,269bp，编码一个422-aa的蛋白[3]。同源性比较表明其编码产物的C端（217-369aa）含有类似pfam00534的结构域，属于糖基转移酶家族1，该家族的糖基转移酶催化UDP、ADP、GDP 或 CMP 连接的活化糖基转移至作用底物，包括糖原，6-磷酸果糖，脂多糖。本室通过基因同源重组双交换获得基因缺失变株，与依博素相比，产生的多糖衍生物EPS-15m，葡萄糖组分消失（3