急性胎兔宫内窘迫模型脑NO、iNOS和T—SOD变化实验研究.docVIP

急性胎兔宫内窘迫模型脑NO、iNOS和T—SOD变化实验研究 　　【摘要】 目的 建立孕兔宫内窘迫模型， 探讨胎兔脑一氧化氮（NO）、诱生型一氧化氮合酶（iNOS）和总超氧化物歧化酶（T-SOD）含量变化规律。方法 新西兰大白孕兔30只， 随机分为空白对照组（n=12）、假手术组（n=9）和宫内缺血缺氧组（n=9）， 宫内缺血缺氧组建立孕兔开腹子宫动脉结扎胎兔宫内窘迫缺血缺氧模型， 分别开腹取各组胎兔脑匀浆液测定NO、iNOS和T-SOD含量， 进行统计学比较。结果 与空白对照组比较， 假手术组和宫内缺血缺氧组 NO、iNOS的含量显著升高（P0.01）， T-SOD的含量明显降低（P0.01）， 差异具有统计学意义。与假手术组相比， 宫内缺血缺氧组NO、iNOS显著升高（P0.01）， 差异具有统计学意义；T-SOD降低不显著（P=0.399）。 结论 通过检测孕兔宫内窘迫模型NO、iNOS和T-SOD显示， 胎兔缺氧应激反应强烈， 手术操作及子宫动脉结扎对脑组织内自由基含量影响显著。 　　【关键词】 孕兔；子宫动脉结扎；宫内缺血缺氧；一氧化氮；诱生型一氧化氮合酶；超氧化物歧化酶 　　胎儿窘迫（fetal distress， FD）是围产期新生儿事件最主要病因， 造成死产、新生儿缺血缺氧性脑病（ hypoxie-ischemic encephalopathy， HIE），甚至进一步危及母体。缺血缺氧引起的中、重度新生儿脑损伤， 导致脑瘫、癫痫以及发育迟滞等严重的后遗症， 给社会、家庭和个人带来沉重负担。FD造成的新生儿损害是全身系统性的， 根据其病理特点建立科学合理的动物模型， 是深人研究FD乃至HIE发病机制、治疗方案的基础。本研究通过建立胎兔FD模型， 研究HIE新生兔脑早期NO、iNOS和T-SOD。 　　1 材料与方法 　　1. 1 主要仪器、动物及试剂 30只健康成年新西兰大白兔4周左右孕兔， 普通级。体质量3.2～3.7 kg， 由上海松江松联实验动物场生产， 厦门大学医学院动物中心提供。动物许可证：SCXK（沪）2007-0011。实验动物使用单位许可证编号：SYXK（军）2002-47。动物实验人员资质许可证编号：军动管字第2006E01028。氧自由基试剂盒购自南京建成生物工程研究所。分光光度计（722S， 福建新大陆）， 温度湿度计（HTC-1数字温度湿度计， 漳州安德培）， 鼠兔解剖台、手术器械若干。 　　1. 2 实验分组 实验分组：实验孕兔饲养3 d， 每日傍晚测体温、脉搏、呼吸1次。至孕32～34 d实验， 剔除异常极值动物， 经统计分析， 个体间无明显差异。编号按随机表分成3组， 空白组12只， 假手术对照组9只， 缺血缺氧脑病组9只。 　　1. 3 实验方法 模型制作：妊娠34 d孕兔以2.5%戊巴比妥钠0.1 ml/100 g进行腹腔麻醉后， 耻区下腹部正中切口打开腹腔， 暴露双侧子宫角， 检查胎盘、子宫及孕兔活力。分离出进入每个胎盘的分支动静脉血管， 用无创性血管夹钳夹此分支血管， 持续20 min， 然后松开血管夹， 恢复血流， 对胎兔进行处死、取脑。假手术组胎兔， 在分离出进人每个胎盘的分支血管后， 不进行钳夹， 20 min后直接处死、取脑。空白组对照组胎兔不做任何处理， 直接处死、取脑。 　　1. 4 观察指标 A014 -1 iNOS分型试剂盒， A012 NO试剂盒（硝酸还原酶法）， A001-1 羟胺法SOD试剂盒均由南京建成生物工程研究所提供， 严格按其说明书操作。 　　1. 5 统计学方法 全部数据应用SPSS 13.0统计软件处理， 采用One-Way ANOVA Test统计分析， 方差不齐时非参数法秩和检验Kruskal-Wallis Tset（H检验）， 组间均数用Bonferroni法两两比较， 结果以均数±标准差（ x-±s）表示， P0.05视作差异具有统计学意义 。 　　2 结果 　　空白对照组、假手术组和宫内缺血缺氧组3组胎兔脑组织iNOS、NO和T-SOD含量之间比较差异具有统计学意义（P0.05）。宫内缺血缺氧组脑组织NO、iNOS含量较空白和假手术组均明显升高（P0.01）；而假手术组上述指标也高于空白对照组（PiNOS0.01， PNO=0.07）。与空白对照组比较， 假手术组和宫内缺血缺氧组T-SOD的含量明显降低（P0.01）， 见表1。 　　3 讨论 　　胎儿宫内窘迫是指胎儿在子宫内因为缺血缺氧和酸中毒导致危及其健康和生命的综合症， 可致新生儿窒息。窒息可导致新生儿低氧血症和混合性酸中毒， 是围生期胎儿及新生儿死亡的重要原因之一。 　　新生儿窒息是围生期常见病， 窒息时缺氧导致机体的损害是全身性和多脏器的