肺纤方对肺纤维化大鼠血清细胞因子表达的影响.docVIP

肺纤方对肺纤维化大鼠血清细胞因子表达的影响 　　摘要：目的 观察肺纤方对博来霉素所致肺纤维化大鼠血清肿瘤坏死因子（TNF-α）、血小板衍生生长因子（PDGF）和转化生长因子（TGF-β1）的影响，并探讨其作用机理。方法 144只健康Wistar大鼠随机分成空白组、模型组、阳性组及肺纤方高、中、低剂量组，每组24只。按Szapiel法建立模型，次日灌胃给药。空白组与模型组给予等量生理盐水，阳性组用醋酸泼尼松混悬液（6 mg/kg）灌胃，肺纤方高、中、低剂量组（3.2、1.6、0.8 g/kg）均为10 mL/kg药液灌胃，1次/d，给药21 d。分别在造模后第7、21日后分2次取材，每次随机杀检10只。腹主动脉取血，采用ELISA法检测TNF-α、PDGF和TGF-β1。结果 与模型组比较，阳性组和肺纤方各组TGF-β1、PDGF和TNF-α明显降低（P0.05，P0.01）；其中肺纤方中、高剂量组TGF-β1、PDGF和TNF-α含量的水平显著降低（P0.05，P0.01）。结论 肺纤方能有效降低血清中TGF-β1、PDGF和TNF-α的水平，对博来霉素所致的大鼠肺纤维化具有干预作用，且呈现一定的量效关系。 　　关键词：肺纤方；博来霉素；肺纤维化；细胞因子；大鼠 　　中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2013）04-0038-03 　　特发性肺纤维化（IPF）是原因不明的、以普通型间质性肺炎（UIP）为特征性病理改变的一种慢性纤维化性间质性肺疾病。本实验采用博来霉素复制大鼠肺纤维化模型，在纤维化形成阶段应用肺纤方干预，旨在探讨肺纤方对实验性肺间质纤维化的治疗作用，并从细胞因子的角度探讨肺纤方干预肺纤维化的作用机理。 1 实验材料 　　1.1 动物 　　清洁级健康Wistar大鼠144只，雌雄各半，体质量（200±20）g，山西省中医院实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK （晋）2009-10。 　　1.2 药物 　　肺纤方由柴胡、黄芩、党参、半夏、天花粉、五味子、干姜等组成，中药材由本院门诊药房提供，经煎煮、减压浓缩、干燥、称重、制粒成型（批；博来霉素（BLM）A5（哈尔滨博莱制药有限公司生产，批号090607）；醋酸泼尼松片（天津太平洋制药有限公司生产，批号090707）。 　　1.3 试剂 　　肿瘤坏死因子（TNF-α）、血小板衍生生长因子（PDGF）和转化生长因子（TGF-β1）ELISA试剂盒均由武汉博士德生物技术有限公司生产，批号分别20091205 　　1.4 仪器 　　TEC2800石蜡包埋机（湖北泰康），生物组织切片机（上海京工），生物组织脱水机（北京宇艾奇），Olympus CK-2倒置显微镜（北京长恒荣）。 　　2 实验方法 　　2.1 造模及分组 　　将大鼠随机分成空白组、模型组、阳性组及肺纤方高、中、低剂量组，按Szapiel法[1]建立模型。20%乌拉坦腹腔注射麻醉大鼠，将其仰卧固定于大鼠实验台上，消毒后切开颈部皮肤，逐层分离，充分暴露气管，模型组及各治疗组用1 mL注射器向气管内缓慢注入稀释的BLM A5溶液，空白对照组注入等容量生理盐水，注射后立即将动物直立并旋转，使药物均匀散布于双肺内，然后逐层缝合，常规关口，创口消毒，置于实验室内保温喂养，待其自行苏醒，实验期间动物自由饮水和进食。 　　2.2 给药 　　造模后第2日，开始灌胃，每次10 mL/kg。肺纤方低、中、高剂量组分别给予相应浓度的肺纤方药液（0.8、1.6、3.2 g/kg），相当于1.45、0.73、0.36 g原药材/mL（以浸膏含量计算，相当于人临床日用剂量的15、7.5、3.75倍）；阳性组给予醋酸泼尼松混悬液（6 mg/kg），相当于人临床日用剂量48 mg的7.5倍；空白组与模型组给予等量生理盐水灌胃。均1次/d，给药21 d。 　　2.3 检测指标 　　于第7、21日，用20%乌拉坦腹腔注射麻醉、固定大鼠，暴露其腹腔，用5 mL注射器于动物腹主动脉取血4 mL。室温静置标本2 h，4 ℃、3 000 r/min离心15 min分离血清，存放于-70 ℃冰箱。TNF-α：采用ABC-ELISA方法检测。严格按照试剂盒提供的方法、步骤进行反应。在450 nm处，用酶联仪测吸光值（OD），与标准曲线比较，确定TNF-α的含量。PDGF：采用ELISA法进行检测。将血清标本稀释5 000倍，严格按照试剂盒说明书的操作步骤进行反应。在450 nm处，用酶标仪测吸光值（OD），与标准曲线比较，确定PDGF的含量。TGF-β1：采用ABC-ELISA法检测。严格按照试剂盒提供的方法进行反应