HGF、CMet和VEGF在子宫癌中的表达及其临床意义.docVIP

HGF、CMet和VEGF在子宫癌中的表达及其临床意义 　　【摘要】目的检测HGF、CMet和VEGF蛋白在子宫癌中的表达情况，分析三者在子宫癌的发生、发展、转移和侵袭等方面的作用，为判断子宫癌的预后及基因靶向治疗提供理论及实验依据。方法选取我校附属医院2009年12月至2010年8月期间收集的子宫癌手术患者35例，取其癌组织标本作为研究组；取35例子宫肌瘤患者的组织标本为对照1组；同时选取35例门诊手术患者中正常子宫组织标本作为对照2组，对照检测HGF、CMet和VEGF蛋白的表达，比较它们在子宫癌组织、子宫肌瘤组织和正常组织中的表达情况。结果HGF在子宫癌中的阳性表达为7143%（20/35），显著高于子宫肌瘤组857%（3/35）和正常子宫组286%（1/35），P005。结论HGF、CMet和VEGF蛋白在子宫癌中的表达显著上调，其过度表达可能为子宫癌的促发因素之一，与患者的预后密切相关。 　　【关键词】子宫癌；肝细胞生长因子；肝细胞生长因子受体；血管内皮生长因子 　　作者单位：276000临沂，山东医学高等专科学校子宫癌是妇科最常见的恶性肿瘤之一，占妇科肿瘤的10%～20%，据世界卫生组织估计80年代全世界子宫癌每年新发病例为459万，而中国则为1315万，约占新发病例总数的1/3。而且，近年来世界各国资料均显示子宫癌有年轻化和子宫颈腺癌发病率上升的趋势。肿瘤的发生与发展是近年来国内外研究的热门课题，尤其是多种因子在肿瘤的发生、发展和血管再生中的作用日益受到重视。大量研究证实恶性肿瘤的发生、发展和侵袭、转移涉及到多基因、多因素及多分子水平的过程，是一系列复杂的级联式反应[1]。国外研究表明，在肿瘤细胞的侵袭、转移过程中，肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor， HGF）发挥了非常重要的作用。HGF是由间质细胞分泌的一种多效性生长因子，其生物活性由单一受体CMet 蛋白所介导，CMet表达于多种上皮细胞上，两者结合后，在调控组织和血管再生、胚胎发育以及损伤修复等过程中有重要作用[2，3]。并且HGF/CMet参与多种细胞因子的调控，血管内皮生长因子（vascular epithelial growth factor，VEGF）即是其中之一。肿瘤血管生成有多种调控因子，VEGF是高度特异的促血管内皮细胞有丝分裂素，并且是目前已知的作用最强的一种促血管生长因子[4]， VEGF表达水平高低反映了肿瘤血管内皮细胞增殖、迁徙和血管构建的水平。HGF可通过3磷脂酰肌醇激酶途径诱导VEGF的表达和分泌，从而促进肿瘤血管的形成[5]。目前国内外尚无HGF、CMet、VEGF和子宫癌关系的研究和报道，为了解HGF、CMet和VEGF与子宫癌发生、发展及预后的关系，本研究采用免疫组织化学方法（PV二步法）检测HGF、CMet和VEGF蛋白在子宫癌中的表达情况并探讨其临床意义。 　　1资料与方法 　　11临床资料收集35例我校附属医院2009年12月至2010年8月期间收治的子宫癌患者行根治性手术后所留取的标本，所有患者术前6个月内均未使用过激素治疗，未经化疗和放射治疗，也无其他严重的内外科疾病。均经病理检查确诊，有详细的病理资料和临床记录。每一例组织离体后迅速用生理盐水冲洗掉血迹，用无菌手术刀在肿瘤中心部位切取癌组织，经复习HE切片，再次光镜诊断后，用10%多聚甲醛固定，常规脱水、透明、石蜡包埋，5 μm厚切片。另取35例同时间内收治的子宫肌瘤患者的组织标本为对照1组，35例门诊手术患者中正常子宫内膜组织标本为对照2组，同样制备石蜡切片，收起备用。 　　12方法 　　121主要试剂兔抗人HGF多克隆抗体（工作浓度1∶200）、兔抗人CMet多克隆抗体（工作浓度1∶300）、兔抗人VEGF多克隆抗体（工作浓度1∶200）、免疫组织化学（PV9000二步法）山羊抗兔二抗试剂盒和DAB显色试剂盒均购于北京中杉金桥生物技术有限公司。 　　122检测方法采用免疫组织化学PV9000二步法。切片常规脱蜡，梯度水化，PBS（pH74）冲洗3 min×3次，001 mol/L柠檬酸缓冲液微波炉加热修复抗原，PBS冲洗3 min×3次，3%过氧化氢去离子水室温孵育10 min，以阻断内源性过氧化物酶活性，PBS冲洗3 min×3次，分别滴加HGF、CMet和VEGF一抗工作液，放入湿盒，4℃冰箱孵育过夜，次日取出室温放置30 min，PBS冲洗3 min×3次，滴加二抗，室温孵育20 min，PBS冲洗3 min×3次，DAB染色，苏木素复染，返蓝，中性树胶封片。所有染色均在相同条件下进行，各组均留取一张切片作HE染色。用已知阳性的甲状腺癌组织切片作为阳性对照，PBS液代替一抗作阴性对照，重复以上步骤。