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HSVⅡ—DNA在生殖器疱疹检测中的应用 　　[摘要] 目的 探讨HSVⅡ-DNA检测对生殖器疱疹中Ⅱ型单纯疱疹病毒（HSVⅡ）阳性检出率的应用价值。 方法 选取本院2010年7月～2012年7月性病门诊收治的生殖器疱疹患者135例为实验标本，分别予以荧光定量聚合酶链反应法（FQ-PCR）检测 HSVⅡ-DNA和血清酶联免疫吸附法（ELISA）检测HSVⅡ抗体，再以病毒培养法评价以上两种方法的检出率。 结果 FQ-PCR 法HSVⅡ-DNA检测的HSVⅡ阳性检出率为74.1%，ELISA法HSVⅡ抗体检测的HSVⅡ阳性检出率为65.2%，作病毒培养标准检测的HSVⅡ阳性率为80.7%；FQ-PCR法检测HSVⅡ的灵敏度、阳性及阴性预测值、特异性显著高于ELISA法。 结论 FQ-PCR 法HSVⅡ-DNA检测的HSVⅡ阳性检出率更贴近于金标准值，并且检测上具有特异性强、灵敏度高、快速等优越性，对于临床诊断生殖器疱疹具有重要的应用价值，值得推广应用。 　　[关键词] 阳性率；生殖器疱疹；病毒培养；单纯疱疹病毒 　　[中图分类号] R752.1 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2013）13-0092-02 　　生殖器疱疹（简称GH）是临床常见的一种性传播疾病，由感染单纯疱疹病毒（HSV）所引起[1]。HSV又分为Ⅰ型和Ⅱ型，近年来研究发现，GH的主要感染病原体为HSVⅡ，且发病率逐年增加，已成为最主要的生殖器溃疡疾病之一[2]。目前HSVⅡ的实验室检测方法颇多，本文采用FQ-PCR法检测GH患者的HSVⅡ-DNA，并与ELISA法HSVⅡ抗体检测进行对比，探讨该方法对于GH诊断的临床检测意义，现报道如下。 　　1 资料与方法 　　1.1 临床资料 　　选择本院2010年7月～2012年7月性病门诊收治的生殖器疱疹患者135例为实验标本，其中男91例，女44例，年龄21～56岁，平均（35.3±7.7）岁，病程3 d～5年。入选标准： ①有非婚不洁性接触史或者是配偶有GH病史；②生殖器、外阴或者是宫颈皮肤或黏膜有红斑、裂隙、丘疹、水疱、糜烂、溃疡、脓包和结痂等，局部刺痛瘙痒；③近两周内未使用过抗病毒药、抗生素以及免疫调节剂。 　　1.2 方法 　　1.2.1 标本的采集 采用无菌棉签擦取患者皮损部位的液体或者是阴道分泌物，放入0.5 mL的生理盐水中；另同时采少量标本，立即放入0.5 mL的病毒移送液中，置入-70℃的冰箱中保存备用。同时抽取2 mL的患者静脉血，进行离心取血清备用。 　　1.2.2 HSVⅡ检测 ①HSVⅡ抗体检测：采用美国Trinity公司生产的HSVⅡ检测ELISA试剂盒，根据试剂盒说明进行具体严格操作。采用酶标仪（美国Hyperion-MR生产）对血清样本进行HSVⅡ抗体检测。②HSVⅡ-DNA检测：采用的试剂盒为深圳匹基生物工程公司生产，在HSV-DNA保守聚合酶基因序列的设计引物上进行FQ-PCR检测，根据试剂盒说明严格予以操作。③病毒培养：取0.1 mL病毒移送液，将其接种到已经成片的Vero细胞上，在37℃温度中吸附2 h后再注入维持液，进行37℃恒温培养，观察细胞的每日病变（CPE），第3天后若无CPE出现，即汲取培养液0.1 mL，将其转种于新制单层Vero细胞上继续进行观察，如此盲传3代，仍然没有出现典型CPE，病毒分离报告即可定为阴性。 　　1.2.3 评价FQ-PCR和ELISA （1）以病毒培养检测出的结果为金标准，对上述两种方法检测 HSVⅡ的特异度、灵敏度、阳性及阴性预测值分别予以计算，并进行评价。（2）特异性是指HSVⅡ检测在生殖器疱疹患者以外的人群中的百分比或者是真阴性率，抽选非患该病者为对照组，然后与本组实验对象进行“+”“-”分布频数计算。特异性（%）=真阴性/（假阳性+真阴性）×100%， 灵敏度（%）=真阳性/（假阴性+真阳性）×100%。 　　1.3 统计学方法 　　采用SPSS13.0软件，计数资料以[n（%）]表示，采用χ2检验，P 0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 HSVⅡ阳性检出率 　　135例患者FQ-PCR法行HSVⅡ-DNA检测检出HSVⅡ阳性100例（74.1%），135例患者中ELISA法HSVⅡ行抗体检测检出HSVⅡ阳性88例（65.2%），135例患者作病毒培养检出HSVⅡ阳性109例（80.7%），FQ-PCR法HSVⅡ阳性检出率明显更贴近于标准值。 　　2.2 评价HSVⅡ检测效果 　　FQ-PCR法检测HSVⅡ的灵敏度、阳性及阴性预测值、特异性显著高于ELISA法。 　　3 讨论 　　生殖器疱疹（GH）较容易复发，常给患者的性心理障碍及生活质量造成巨