人β—防御素—2在涎腺肿瘤及涎腺炎症中的表达及其意义.docVIP

人β—防御素—2在涎腺肿瘤及涎腺炎症中的表达及其意义 　　[摘要] 目的 研究涎腺良性肿瘤组织、恶性肿瘤组织和涎腺炎症中人β-防御素-2（HBD-2）mRNA和蛋白的表达特征。方法 对不同涎腺组织，采用聚合酶链反应（PCR）、实时聚合酶链反应（Real-Time PCR）和免疫组化检测HBD-2的表达，并分析HBD-2 mRNA和蛋白在涎腺良性肿瘤组织、恶性肿瘤组织、炎症组织和正常涎腺组织中的表达差异。结果 与涎腺正常组织比较，良性肿瘤组HBD-2 mRNA表达量为其6.468倍，显著高于涎腺正常组织组（P0.05）；恶性肿瘤组为其0.334倍，显著低于涎腺正常组织组（P0.05）；涎腺炎症组为其10.563倍，显著高于涎腺正常组织组（P0.05）。HBD-2不仅在这些组织的细胞质中有表达，而且在恶性组织中的细胞核也有表达。结论 HBD-2在涎腺良性肿瘤组织及涎腺炎症组织中高表达，在涎腺恶性肿瘤组织中低表达，其蛋白发生核转移。 　　[关键词] 人β-防御素-2； 涎腺肿瘤； 涎腺炎症 　　[中图分类号] Q 786 [文献标志码] A [doi] 10.7518/hxkq.2013.05.017 　　在我国涎腺肿瘤占人头颈部肿瘤的2%～3%[1]，发病率比较高，常发生在主要的腺体中。β-防御素属于抗菌肽（antimicrobial peptides，AMPs），在天然免疫过程中表现多种作用，属于固有免疫系统，对于抗原呈递的树突细胞具有诱导刺激作用[2]。最近人β-防御素-2（human beta-defensin-2，HBD-2）被认为是位于染色体8p23上的备用肿瘤抑制基因，HBD-2基因在一系列细胞中的超表达导致细胞凋亡蛋白-3调控细胞凋亡或者是细胞的完全死亡通过特殊的细胞表面受体来调节[3]。HBD-2首先在牛皮癣患者的皮肤中被发现，还表达于包皮、肺、气管、口腔黏膜等组织[4]，HBD-2通过上皮表面分泌的一种小的可溶缩氨酸发挥抗菌作用。HBD-2能被细菌、细菌毒性产物以及诸如白细胞介素（interleukin，IL）- 　　1β、IL-16、IL-8或者肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）等细胞因子诱导，此外合成的HBD- 　　2能抑制膀胱癌细胞系TSU-Pr1的增殖，可导致肾癌细胞的凋亡[5]。在90%的肾癌细胞和82%的恶性前列腺癌中都发现有HBD-2的减少，而在良性的上皮瘤中有持续的高表达[6]。本实验旨在研究HBD-2 mRNA和蛋白在涎腺良性肿瘤组织、恶性肿瘤组织、炎症组织和正常涎腺组织中的表达情况，及其在这些中的表达位置。 　　1 材料和方法 　　1.1 实验材料 　　Trizol（Gibco公司，美国），PrimeScript RT MasterMix、PremixTaq Version2.0、实时聚合酶链反应（real-time polymerase chain reaction，Real-Time PCR）SYBR Premix Ex Taq（Takara公司，日本），免疫组织化学试剂盒（Invitrogeng公司，美国），SP免疫组化试剂盒（北京中杉生物技术有限公司）。 　　实验引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。HBD-2的上游引物：5’-CATGAGGGTCT-TGTATCTCCTCT-3’，下游引物：5’-CCTCCTCAT-GGCTTTTTGCAGC-3’。β-actin的上游引物：5’-AA-ACTGGAACGGTGAAGGTG-3’， 下游引物：5’-AG-TGGGGTGGCTTTTAGGAT-3’。 　　1.2 方法 　　1.2.1 标本采集 选取2008—2010年在北京大学深圳医院经手术和病理证实的涎腺良性肿瘤标本32例，其中男19例，女13例，平均年龄45.7岁。正常涎腺标本23例，其中男13例，女10例，平均年龄43.5岁。恶性肿瘤标本10例，其中男6例，女4例，平均年龄57.6岁。炎症标本16例，其中男10例，女6例，平均年龄52.9岁。所选标本一份保存于液氮中，用于提取RNA；一份以4%多聚甲醛固定，4 ℃存放，用于免疫组化检测。以上标本的获得均取得患者知情同意。 　　1.2.2 HBD-2在涎腺良性肿瘤组织、恶性肿瘤组织、炎症组织和正常涎腺组织中的表达 用Trizol法从各个标本中提取mRNA，按照逆转录试剂盒说明，将mRNA逆转录成cDNA；将cDNA用于PremixTaq Ver-sion2.0试剂做PCR分析表达情况。并将cDNA用于Real-Time PCR，定量检测HBD-2 mRNA表达，具体的步骤参照试剂盒说明。Real-Time PCR条件： 　　95 ℃ 5 min；9