《5分子生物学技术.pptVIP

ＤＮＡ的变性 在某些理化因素作用下，DNA分子互补碱基对之间的氢键断裂，使ＤＮＡ双螺旋结构松散，变成单链，即为ＤＮＡ变性。 DNA是否发生变性的常用指标是DNA对260 nm波长吸光值（A260）变化。 实验室最常用的方法是加热。 ＤＮＡ的复性 变性ＤＮＡ在适当条件下，两条互补链可重新配对，恢复天然的双螺旋构象，这一现象称为复性。 热变性的ＤＮＡ经缓慢冷却后即可复性，又称退火 。 核酸分子杂交 DNA复性时，如果将不同种类的DNA单链分子或RNA分子放在同一溶液中，只要两种单链分子之间存在一定程度配对关系，在适宜的条件下（T、离子强度），就可以在不同的分子间形成杂化双链。 杂化双链可以在不同的DNA分子之间、DNA与RNA之间、 RNA与RNA之间。 核酸研究中的应用十分广泛。 探针技术 探针是经过特殊标记的核酸片段，具有特定的序列，能够与待测的核酸片段互补结合，因此可用于检测核酸样品中的基因。 标记物：同位素、生物素或荧光染料 核酸片段：人工合成、克隆的基因组DNA、cDNA、RNA 探针种类：DNA、RNA 印迹技术基本原理 凝胶电泳 ? 转移 ? 杂交 ? 放射自显影 或化学显色 RNA 印迹技术: Northern blotting 与DNA b