pricells原代细胞培养技术指南2012版武汉原生原代生物医药科技.docVIP

PriCells原代细胞培养技术 2012版 武汉原生原代生物医药科技有限公司 PriCells销售热线：027 PriCells技术咨询：027 基 础 篇 1、收到活细胞的第一天，怎样操作，哪几个步骤？ （1）收到细胞后，检查是否有运输问题，即原代细胞培养瓶或管是否破损，原代细胞培养液是否溢出。（2）若没有运输问题，请75％酒精消毒后，拆下封口膜，放入细胞培养箱中静置。（3）严格检查培养箱的参数。 （4）原代细胞静置时间一般为24小时后，细胞状态稳定后，即可开始后续操作。 （5）选用正确的原代细胞培养体系。 （6）培养的前三天，要求每日至少3－5张细胞照片。 2、收到原代细胞如何初步判断细胞是否良好？ （1）收到冻存的原代细胞复苏后，第2天原代细胞贴壁良好，换液；第4－5天原代细胞基本上可置80－90％（T25－Flask）。 （2）收到存活的原代细胞细胞后，需静置培养24小时，保留5－8ml原代细胞培养液；第2天换液；第4－5天原代细胞基本上可置80－90％（T25－Flask）。 3、收到存活的原代细胞瓶内的原代细胞培养液可以继续使用吗？ （1）无菌操作下吸出可以继续使用。 （2）4°C保存。 4、原代细胞培养时，瓶内少量漂浮物是什么？有漂浮物就证明存在污染吗？ （1）原代细胞培养时，会有些漂浮物。 （2）漂浮物一般是死细胞或细胞的代谢产物，原代细胞培养时有少量漂浮物，属正常情况。 （3）原代细胞培养污染时，培养液变浑浊。PriCells销售热线：027 PriCells技术咨询：0275、原代细胞培养细胞不贴壁，是否细胞死亡吗？ （1）有些原代细胞是非贴壁生长。 （2）刚收到的存活的原代细胞时，因为运输途中的颠簸，原代细胞会出现不贴壁，需静置培养24小时。 6、为什么说原代细胞培养消化步骤很关键？有哪几个要点？ 因为消化需要用到胰酶，胰酶对细胞是有伤害的。消化时要严格控制消化时间，不可以过长，一般1-2或2－3分钟（经验非常重要），观察到细胞变圆而非完全脱落，即可拍打瓶壁使其脱落，然后终止消化。7、原代细胞培养大致几天需要换液，几天可传代？以何为标准？ （1）一般2-3天换一次液，以培养液的颜色为标准，一般变黄后就需换液。 （2）前期3-4天传一次代，后期4-6天传一次代。（前期指前三代，后期指三代后） 8、原代细胞培养过程中，从哪几个方面可以判断细胞好坏？ （1）细胞生长速度：一分二之后，3－4天可以长满，细胞状态则较好。（2）细胞形态：形态统一，没有老化现象。 9、如何防止原代细胞在培养过程中的污染？ （1）细胞培养室非同普通实验室，最好10万级。 （2）严格的无菌操作。 （3）不要与他人混用实验试剂和工具。 （4）细胞培养箱中不要放有其他细胞培养。 PriCells销售热线：027 PriCells技术咨询：02710、原代细胞培养的大致传代规律是什么？所有原代细胞都能传到第10代吗？ （1）原代细胞因品种不同传代次数不一样。 （2）不是所有的原代细胞都能传到10代，大部分原代细胞能传到6－8代。 （3）有经验的技术人员，原代细胞能传代次数增加。 11、为何建议客户选购存活细胞？活细胞运输的优点？ （1）因为收货后即可使用，不用担心因为复苏不好造成细胞状态欠佳 （2）因运输需要，培养瓶中灌满的培养体系是可以再使用的。如果不需要传太多代，则可直接购买活细胞不用单独再买培养体系，可节约经费。 12、原代细胞培养过程中，选用PriCells培养体系，还需要添加其他培养产品吗？ 不需要。如特殊需，我公司技术人员会提前告之。 13、PriCells原代细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？为什么？ （1）客户造成细胞污染，不重发。 （2）客户不正确操作致细胞状态不好，不重发。 （3）非PriCells原代细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发。 （4）细胞状态不好，未提供原代细胞培养前3天照