实验九 过氧化物酶活性的测定课件.pptVIP

实验七 过氧化物酶活性的测定 原 理： 过氧化物酶广泛分布于植物的各个组织器官中。在有过氧化氢存在下，过氧化物酶能使愈创木酚氧化，生成茶褐色物质，可用分光度计测量生成物的含量。 材料与设备 实验材料: 海桐、黄杨叶 操作步骤： 1．称取植物材料约0.2g，加入，0.1mo1/L磷酸缓冲液 (pH7.0) 7ml(分次加入,最后用于洗研钵)，在研钵中研磨成匀浆，过滤或以 7000r／min 离心15分钟，倾出上清液。 操作步骤： 2. 3.0 ml 0.3%愈创木酚反应液，加200ul 3％过氧化氢，最后加酶液20ul （视酶活性大小而定，如酶浓度高可稀释后再测定），摇匀，立即在分光光度计470nm下测吸光度，从加入过氧化氢时立即开启秒表记录时间，1min读数一次（也可2min，视材料而定）。 操作步骤： 3．以每分钟吸光度变化值表示酶活性大小。 过氧化物酶活性(U)= △A470 ×稀释倍数/g.Fw.min 作业： 1.写实验报告 2.问题： （1）过氧化酶在植物体内的主要作用是什么？ （2）比色时为什么要在3min 内完成。 * * 试 剂： 3％过氧化氢；，0.1mo1/L磷酸缓冲液pH6.0，pH7.0； 0.3%愈创木酚反应液：100 mmo1／L磷酸缓冲液（pH 6．0）100 ml于烧杯中，加入愈创木酚0.3ml ，于磁力搅拌器上