D-塔格糖生物转化的进展综述.ppt

D-塔格糖的研究进展 沐万孟wmmu@jiangnan.edu.cn Contents 塔格糖的生理活性和功能 塔格糖的理化性质 塔格糖的生理活性和功能 塔格糖代谢途径 塔格糖的应用现状 2000年FDA已正式批准塔格糖作为甜味剂用于食品饮料业以及医药制剂中； JECFA（联合国粮农组织和世界卫生组织联合食品添加剂委员会）第57次会议批准塔格糖作为食品添加剂，推荐ADI值0-80mg/kg； 欧盟也于2003年批准塔格糖在欧洲上市； 目前塔格糖在美国已被大量用于健康饮料以及酸奶、果汁等产品中作为白糖的代用品。塔格糖产品目前已获得美国、澳大利亚、日本、韩国等食品卫生部门批准使用，在我国仍未获得批准使用。 塔格糖的应用现状 2006年8月百事可乐公司正式在雪碧饮料中使用塔格糖，作为风味的强化剂，这是塔格糖第一次进入商业领域。 2007年新西兰Miada运动营养食品公司将塔格糖应用于巧克力产品的开发，五月投放澳大利亚和新西兰超级市场。据BCC预测，新进入市场的塔格糖将会以一种稳定的速度增长，估计在今后五年内为20％～25％。  关于塔格糖的专利情况 2000 Process for manufacturing D-tagatose 从干酪乳清、牛奶或其混合物中利用若干步骤（包括L- AI 催化）产生D-塔格糖，涉及了许多常温菌属。 2005 Thermostable L-AI and process for preparing D-tagatose （韩国） 利用源自耐热菌属Thermotoga neapolitana的热稳定L-AI生产塔格糖 ，及其基因表达 关于塔格糖的专利情况 2006 Process for manufacturing of tagatose （丹麦） Bacillus, Sulfolobus, Thermoanaerobacter or Thermotoga 2006 Thermostable isomerase and use hereof, in particular for producing tagatose （丹麦） Thermoanaerobacter species such as Thermoanaerobacter mathranii 生物法生产塔格糖的最新进展 Jung-Woo Kim等利用大肠杆菌克隆表达了耐热均Thermus sp. IM6501的AI，该酶最适pH和温度分别为8.0和60℃，并且60U该酶在10mL 0.1%半乳糖溶液中反应3天最终转化率达54%。 研究了耐热酶BHAI和GSAI对金属的依赖性及对金属与酶的构相及活性之间的关联。BHAI无金属依赖性，GSAI的活性受Mn2+的 影响。推测金属在较高的温度下 调节着该酶的活性三级结构。 首次研究了嗜酸耐热菌的AI,最适pH为6.0-6.5，并与源自耐热菌B.halodurance 的AI（最适pH为7.5-8.0）进行比较研究，得到两种突变酶K269E和E268K，Lys-296 对pH有重要作用。 在大肠杆菌中表达了源自耐热菌Thermoanaerobacter mathranii的AI，并研究了双酶及三酶偶联连续化反应器生产塔格糖及混合糖浆。25h后，塔格糖含量可达200mM G. thermodenitrificans L-AI经过单点和双点定点突变技术，获得2个突变点的酶（分别是N475K单点突变 和 C450S-N475K双点突变），经检测，这两种突变酶的酶活为原始酶的1.7和2.6倍。而且使塔格糖的转化率也分别提高12%和20%。 Moez Rhimi等在大肠杆菌中表达了B.stearothermophilus US100的AI,该酶无金属依赖性并且热稳定性高，最适pH和温度分别为7.5和80℃,3mg酶在含有5mM半乳糖的体系中在70 ℃时7h转化率达48%。(51U/mg) 大肠杆菌L-AI单体含有498个氨基酸残基，其晶体结构如左图，由16个β折叠和17个α螺旋构成，可分为三个结构域：N-端结构域（1-176 Aa）、中间结构域（177-327 Aa）和C-端结构域（328-498 Aa）。 大肠杆菌L-AI发挥酶的活性需要在三聚体下才能发挥，分别记号为A、B、C。 三聚体的外表面显示出三个等价的裂口，裂口的组成为一个亚基的C-端结构域和中间结构域与另一个亚基的N-端结构域构成 沿着裂口的氨基酸残基在嗜温、嗜热和高度嗜热的L-AI中都非常保守，这些残基大多位于一个环区域，表明其可能为调节结构以调节活性位点中底物进入和产物释放时的立体结构。 A. Glu306的Oε2亲核进攻D-半乳糖C-2的氢