14DNA的复制、RNA转录.pptVIP

第十四章 DNA的复制与修复 第一节 DNA的复制 DNA是由四种脱氧核糖核酸所组成的长链大分子，是遗传信息的携带者。 生物体的遗传信息就贮存在DNA的四种脱氧核糖核酸的排列顺序中。 DNA在复制时，以亲代DNA的每一股作模板，合成完全相同的两个双链子代DNA，每个子代DNA中都含有一股亲代DNA链，这种现象称为DNA的半保留复制(semi-conservative replication)。 DNA以半保留方式进行复制，是在1958年由M. Meselson 和 F. Stahl 所完成的实验所证明。 该实验首先将大肠杆菌在含15N的培养基中培养约十五代，使其DNA中的碱基氮均转变为15N。然后将大肠杆菌移至只含14N的培养基中同步培养一代、二代、三代。分别提取DNA，作密度梯度离心，将具有不同密度的DNA分离开。 DNA半保留复制研究实验结果示意图 按半保留复制方式，子代DNA与亲代DNA的碱基序列一致，即子代保留了亲代的全部遗传信息，体现了遗传的保守性。 遗传的保守性，是物种稳定性的分子基础，但不是绝对的。 二、DNA的复制过程 DNA的复制可以分成起始、延长和终止三个阶段。 DNA的复制是一个很复杂的过程，它需要解链酶、SSB蛋白、拓扑异构酶、引物酶、DNA聚合酶和DNA连接酶等许多因素。 DNA在复制时，需在特定的位点起始，这是一些具有特定核苷酸排列顺序的片段，即复制起始点(origin) 。 在原核生物中，复制起始点通常为一个，而在真核生物中则为多个。 （1）原核细胞（大肠杆菌）DNA复制的起始： 大肠杆菌的DNA是环状的，复制只有一个起点，并富含A-T的专一序列。 复制开始时，这各序列首先被一个蛋白质DnaA所识别。该蛋白可使DNA的双链分开，并使另一个蛋白质DnaB连接到分开的双链上，使双链向两个方向解旋，称为单起点双向复制。 （2）真核细胞DNA复制的起始： 真核细胞DNA合成通常在S期进行。 细胞进入S期首先必须接受细胞分裂信号，这个信号一般由细胞外的生长因子提供。 真核细胞DNA多为线性分子，长度相对较长。复制时常有多个起始位点。 习惯上把两个相邻DNA复制起始点之间的距离（或DNA片段）定为一个复制子(replicon) 。 复制子是独立完成复制的功能单位。 DNA复制时，局部双螺旋解开形成两条单链，这种叉状结构称为复制叉。 复制起始点、复制子与复制叉（动画演示） 2、DNA复制时双螺旋的解旋与超螺旋形成 在DNA复制时，解旋作用使复制叉的下游出现正超螺旋，这样会影响双链的进一步解旋。为了使DNA复制能够继续进行，正超螺旋必须放松。 能够使超螺旋放松的因素主要是拓扑异构酶。 DNA拓扑异构酶 单链DNA结合蛋白（single strand binding protein, SSB），又称螺旋反稳蛋白(HDP)，是一些能够与单链DNA结合的蛋白质因子。 SSB的生理作用 使解开双螺旋后的DNA单链能够稳定存在，即稳定单链DNA，便于其作为模板复制子代DNA； 保护单链DNA，避免核酸酶的降解。 4、DNA合成的基本反应和DNA聚合酶 以四种脱氧核糖核酸(deoxynucleotide triphosphate)为底物，即dATP，dGTP，dCTP，dTTP。在聚合酶的催化下，dNTP按模板的要求连接到前一段多聚核苷酸的3’-OH端，释放出PPi。 在原核生物中，目前发现的DNA聚合酶有三种，分别命名为DNA聚合酶Ⅰ（pol Ⅰ），DNA聚合酶Ⅱ（pol Ⅱ），DNA聚合酶Ⅲ（pol Ⅲ），这三种酶都属于具有多种酶活性的多功能酶。 参与DNA复制的主要是pol Ⅲ和pol Ⅰ。 pol Ⅰ为具有三种酶活性的单一肽链的大分子蛋白质，可被特异的蛋白酶水解为两个片段，其中的大片段保留了两种酶活性,即5→3聚合酶和3→5外切酶活性。 pol Ⅲ由十种亚基组成不对称异源二聚体结构，其中?亚基具有5‘→3’聚合DNA的酶活性，具有复制DNA的功能；而?亚基具有3‘→5’外切酶的活性，与DNA复制的校正功能有关。是参与复制的主要酶。 原核生物中的三种DNA聚合酶? 5、DNA复制的过程 DNA复制的起始阶段，由下列两步构成。 （1）解旋解链，形成复制叉： 由拓扑异构酶和解链酶作用，使DNA的超螺旋及双螺旋结构解开，碱基间氢键断裂，形成两条单链DNA。 单链DNA结合蛋白（SSB）四聚体结合在两条单链DNA上，形成复制叉。 （2）引发体组装和引物合成： 由解螺旋酶(DnaB蛋白) 、DnaC蛋白、引物酶(DnaG蛋白)和DNA复制起始区域形成引发体； 在引物酶的催化下，以DNA为模板，合成一段短的RNA片段，从而获得3端自由羟基（3