5植物组织的培养探讨.pptVIP

5 植物组织培养 5.1 植物分生组织培养 5.2 植物愈伤组织培养 5.3其他组织培养 5.1 植物分生组织培养 5.1 植物分生组织培养的概念 包括茎尖分生组织、居间分生组织、侧生分生组织。研究最多的是茎尖分生组织。 5.1.2 分生组织培养的方法 茎尖培养的概念：是切取茎尖部分或茎尖分生组织部分，进行培养的过程。 茎尖培养可分为微茎尖培养和普通茎尖培养。 1)微茎尖：指带有1-2个叶原基的生长锥，其长度不超过0.5mm。 2)普通茎尖：指取几mm到几十mm长的顶芽尖及侧芽尖。 普通茎尖培养： 1．取材： 2．消毒 3．接种 ： 注意：一要防褐化。接种时，不用锈刀，动作敏捷，随切随接，用1～5%VC液浸泡处理。 二要防干燥 4．培养 （1）培养基：采用MS培养基或略加修改，或补加其它物质。也可用其它培养基如White，H等。 培养基中生长素是必须的，如2，4-D，IAA，NAA等，但是浓度不能太高，一般用0.1mg/L左右，若高易产生畸形芽或形成愈伤组织。 2）培养问题处理： 生长太慢、生长太快等情况。 I 生长太慢：接种后茎尖不增大，只是茎尖逐渐变绿，出现绿色小点，细胞逐渐老化而进入休眠状态，或者逐渐变褐死亡。 原因：生长素浓度太低，或是温度过低或 过高； II 生长太快型：是接种后茎尖迅速增大，在茎尖基部产生愈伤组织，并迅速增殖，而茎尖不伸长，久之茎尖也形成愈伤组织。 引起原因：一是生长素浓度过高，引起细胞疯狂分裂而导致愈伤组织的形成。二是光照太弱或温度太高。 脱毒基本原理：病毒在植物体内的分布具有不均匀性 茎尖脱毒是控制植物病毒的有效途径。 优点: 5.1.3 影响分生组织培养的因素 1.培养基 2.外植体的大小 外植体越大，成活率越大，越小，脱毒效果越好。 叶原基的存在与否影响分生组织的分化能力（能提供生长素和细胞分裂素）。 5.1.3 影响分生组织培养的因素 3. 培养条件 光培养暗培养 4.外植体的生理状态 选择活跃生长的芽，在香石竹和菊花中，培养顶芽茎尖比培养腋芽茎尖效果好。但在草莓中，二者没什么差别。 取芽的时间也很重要（一般选作萌动期）。 愈伤组织培养的概念 愈伤组织培养（callus culture）——是指将母体植株上的各个部分切下，形成外植体（explant）,接种到无菌的培养基上进行愈伤组织诱导、生长和发育的一门技术。 5.2.1　愈伤组织的诱导和分化 　一、愈伤组织的诱导 　细胞是生物结构和生命活动的基本单位，能够分裂、繁殖和分化出不同功能的组织和器官，且具有细胞全能性（提问）。但是一个已分化的细胞若要表现其全能性，首先要经历脱分化过程，然后再经历再分化过程。 什么叫脱分化？ 脱分化（dedifferentiation） —— 是指一个已停止分裂的成熟细胞转变为分生状态，并形成未分化的愈伤组织的现象。 一般认为诱导愈伤组织成败的关键不在于植物材料的来源，而在于培养的条件。 植物生长调节物质是诱导愈伤组织极为重要的因素。　　　 　　　植物生长调节物质有哪两大类呢？ 常用的生长素是——2,4－D、IAA和NAA，浓度为0.01—10mg·L-1，如诱导玉米胚愈伤组织发生的培养基为MS+2,4－D8+NAA１，很多情况下单独用2,4－D就可； 常用的细胞分裂素是——激动素和6-BA，使用的浓度范围在0.1—10mg·L-1。 两者结合应用时，能更强烈地刺激愈伤组织的形成。 二、愈伤组织细胞的分化 在某些实验条件下，愈伤组织可以再分化成苗或根的分生组织甚至是胚状体。在分化过程中，植物生长调节物质的作用是极为明显的，合适的植物激素配比在器官分化中有着重要的作用。当生长素与细胞分裂素的比例高时，仅形成根，生长素与细胞分裂素的比例低时则产生苗。 第二节 愈伤组织培养中的形态发生 愈伤组织培养物在某些条件下，可以再分化产生不定芽或不定根的分生组织甚至是胚状体，继而发育成苗或完整小植株。 愈伤组织再生成植株有三种方式 一、不定芽和根的形成 在许多木本植物愈伤组织形成再生苗的培养过程中，常常是将诱导不定芽与诱导不定根分两步完成。即利用分化培养基，愈伤组织形成不定芽。当不定芽长大出现叶片后，再将伸长的苗切去基部，转入含生长素（IBA、NAA）的生根培养基上生成不定根。这是一种较为常见的器官发生方式。 许多实验结果表明，在栽培或插条中容易再生的植物，其器官或组织在离体培养下也容易再生。 通常在培养中先形成不定芽者，其基部多易生根；但有些植株完成再生苗后，生根仍较困难。 二、体细胞胚胎发生 体细胞胚——将离体或活体条件下，体细胞经原