酶标仪检测酸性 α-淀粉酶酶促动力学.docVIP

实验二 酶标仪检测酸性 α-淀粉酶酶促动力学 一 实验目的 通过SpectraMax M5 酶标仪的演示使用，了解该型号酶标仪的结构；掌握酶标仪的操作步骤与softMax Pro v5.0.1版本软件的使用。 二 实验指导要点 1.酶标仪仪器安装连接 2.仪器使用、保养注意事项 3.软件操作步骤 三 仪器设备及实验材料 SpectraMax M5 酶标仪 、softMax Pro v5.0.1版本软件、酸性 α-淀粉酶提取液 四 仪器检测参数设定 1 SpectraMax M5 酶标仪构造 酶标仪需要用专门连接线(仪器自带)与电脑连接，并有连接线两边插头、仪器背面的插口和电脑背面的9针串口(COM)。 2仪器使用、保养注意事项 电源要求：酶标仪对电源要求很高，我们要求的电源有接地，并通过不间断电源UPS来对仪器和电脑接点，防止：1）大电流的冲击，2）电压不稳，3）突然断电。 保养要求： 有良好的电源，保持24小时开机。 保持避光和干净的室内环境，维持一定的湿度(30%-80%)。 维持室内比较恒定的温度，以20-22度为最适宜。 适用6-384孔板。96孔微孔板内每孔可检测100-300ul溶液，最佳检测体积为200ul。 384孔微孔板内每孔可检测50-100ul溶液，最佳检测体积为80ul。 检测后的微孔板和比色皿不要长期置于仪器插槽中，检测完后就从仪器中取出，避免溶液蒸发腐蚀或损坏仪器内部光路系统。如果为有腐蚀性或挥发性溶液，请带盖检测。 对于可见光吸收检测，使用全透明微孔板；紫外光吸收检测，使用紫外可透全透明微孔板；荧光强度和荧光偏振，使用黑色不透明板，需要检测底读的用黑色底透微孔板；化学发光和时间分辨荧光，使用白色不透明微孔板。 3 softMax Pro v5.0.1版本软件使用 双击图标即可打开以下软件操作界面： 1）单击即可进入如下界面： 首次使用该软件，在该界面可以填写Reader的型号，包括Molecular Devices所有类型（单功能和多功能）的酶标仪。选择您所购买的那款酶标仪型号，本例为SpectraMax M5。 2）实验监测参数都设定完毕后，把微孔板或比色皿放入想对应的插槽，然后按可以启动仪器进行监测。 3）仪器可以设定温度，均在室温以上加温。当开启温度控制后需使仪器的微孔板插槽置于关闭状态保持所设温度，如果处于打开状态，仪器会发出报警声，然后自动关闭微孔板插槽。 4）该仪器有使用震荡功能，时间课设定1-999s。 4 仪器参数设定 所有对仪器的参数设定都可以在Settings 中完成。按住Settings键后出现如下对话框： 四种监测类别： 终点法检测 即获得在单一时间点的样品检测值 动力学法监测 即获得在预先设定的时间段中样品在不同时间点的检测值 波长扫描监测 即获得样品在连续多个波长处的检测值 单孔多点监测 即获得每孔样品在多个位置进行监测并且平均后的检测值 A终点法检测 Read Mode 可选择Fluorescence（荧光强度），Absorbance（光吸收），Luminescence（化学发光），Time Resolved（时间分辨荧光），Fluorescence Polarization（荧光偏振）五种读版模式。按实验选择其一。 仪器默认读板方式为Top read（顶读），适用于均相溶液和悬浮细胞的监测；若在‘Read From Bottom’选项前打勾，则仪器改为Bottom Read（底读）读板方式，适用于贴壁细胞的监测。 2）Wavelengths 处可以选择监测几种波长，光吸收模式最多为6种，其他模式均为四种。 a) 对于光吸收模式，可以在Lm1后面的框中填入监测所用波长。 b) 对于荧光强度，时间分辨荧光和荧光偏振模式，可以在2个框中分别填入激发波长和发射波长。Cutoff一般选为自动（Auto） c)对于化学发光模式，一般用’All’.当同时监测不止一色化学发光的时候可填入相应的检测波长。 ）PathCheck 仅用于光吸收模式，即将微孔板监测得到的原始光吸收值通过参比校正到1cm光径长度时的光吸收值。可选择’Water Constant’(以水做参比)和’Cuvette Refence’(在比色皿中加入相应溶液预读一次作为参比)。另外可以选择’Plate background constants(in ODs)’来扣除微孔板的本底值，即拿同批次的微孔板加入相同体积的水预先读一次检测波长，得到所有孔的数据取平均值，将平均值填入下面的框中。默认OD为0，类似于做空白对照。 ）Assay Plate Type 6-384孔板及其具体的板型。选择原则见硬件操作步骤及注意事项 5）More setting More setting由两部分组