13第七章 原生质体的分离和培养.pptVIP

* * 第七章 原生质体的分离和培养 原生质体:是指植物细胞中除去细胞的壁的裸露部分. 特点: 1.有全套的遗传信息--------可完成全能性: 2.同一时间获得遗传上的同质体 3.实现远缘杂交; 4.摄取外源DNA细胞器等-------遗传转化的理想实体. 一,原生质体的分离 除去胞间层(粘着)---?单细胞--?除去细胞壁 酶解法:漆斑霉产生的纤维素酶(粗制剂)---分离番茄根尖 细胞原生质体 缺点:可能受到酶的影响 首先:产量高,活性强,能分裂,产生愈伤组织(胚状体) 最终.形成完整植株的原生质 影响因素 取材 酶的种类 酶的渗透压 原生质膜的稳定剂 酶解的时间、温度、纯化方法等 分离: 1.表面消毒: 苄烷铵0.1%+酒精10%--?5min 60%~70%酒精消毒30s---?0.1%HgCl2-?无菌水冲洗3~5次 2.酶解: 撕去叶片下表皮(向下)---?漂浮于酶液中------------------? 真空泵处理 3~5分钟 (2h后)分离出原生质体 3.酶 纤维素酶:消化细胞壁纤维素 果胶酶:降解中胶层 半纤维酶 酶的选择: 愈伤组织、悬浮细胞-------浓度大 活动强的酶 叶片,,浓度小 4.条件: 黑暗 静止 轻摇 时