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第八章 海洋肽类 韩 亮645586) hanliang814@163.com 浙江工业大学精细化工研究所 非蛋白质氨基酸：植物中发现了240种 多官能团饱和脂肪氨基酸 肽类是海洋生物活性物质中数量最庞大的一类化合物，达数万种之上。 近几年已经为广大海洋药物学家所关注，且其部分次生代谢产物已进入临床。 环 肽 环肽：是由氨基酸通过首尾缩合形成酰胺键而成为具有大环的肽类化合物，或通过其余的键如酯键而形成的大环的肽类化合物。 1980年由美国学者ireland从海鞘分离第一个具有抗肿瘤活性的环肽ulithiacyclamide以来，环肽类化合物是目前研究最热的肽类化合物。 环肽类主要来自于海鞘、海兔、海绵以及海藻。 海洋环肽化合物的特征 1.海洋环肽中经常有非正常氨基酸，这是海洋环肽的基本特征，也是保证这类物质有活性的重要结构片断。 非正常氨基酸包括：?、?-氨基酸，D型氨基酸 2.连接方式除了酰胺键以外，还有其余连接方 式，最常见为酯键连接。 海洋环肽的提取与分离 环肽化合物的提取和分离有两种方法： （1）采用经典的生物碱提取法，即酸溶碱化萃取处理后，再用柱层析分离。 （2）用甲醇或乙醇提取后，提取物经石油醚脱脂，用氯仿或乙酸乙酯萃取，再通过柱层析、高效液相、制备薄层以及化学衍生化等方法分离。 环肽类提取分离中的检测： （1）对一些特殊的环肽可以采用生物碱显色试剂，如碘化 铋钾。 （2）茚三酮试剂 环肽类直接用茚三酮试剂是不会显色的，需将环肽类水解成氨基酸再用茚三酮试剂显色。 具体操作如下： 环肽结构鉴定 含有不常见的氨基酸(β-氨基酸、N-取代氨 基酸以及含有卤素、硫元素和噻唑等基团) 样品量都比较少 L－FDLA D－FDLA 肽类毒素 海洋活性物质研究中发展最迅速的重要领域之一 具有神经、心血管、细胞毒作用，以神经毒为主 具有麻醉、强心、抗癌、抗菌和抗病毒作用 毒性作用强烈、药效高、作用剂量小 分子量相对较小，容易通过基因工程进行大批量生产 均有46~49个氨基酸残基组成； 存在6个Cys残基 包括Cys在内共存在12个相同的氨基酸残基 C末端都是亲水性氨基酸残基 都存在3对二硫键 1）一般由10～31个氨基酸残基组成，含2对或3对二硫键。 2）药理学活性丰富，能作用于神经肌肉系统的关键传导部位Na+通道、Ca2+通道及乙酰胆碱受体等，对受体作用具有高选择性和高亲和性。 3）根据作用受体不同，将其分为α-CTX、μ-CTX、ω-CTX及δ-CTX等多种类型。 α-CTX特异阻断突触后膜乙酰胆碱受体； μ-CTX特异阻断神经或肌肉电压敏感性Na+通道，抑制动作电位的产生； ω-CTX特异阻断神经元电压敏感性Ca2+通道 δ-CTX特异作用于神经元电压敏感性Na+通道，延缓Na+流失活速度，延长动作电位持续时间。 糖 蛋 白 糖蛋白：以共价键与糖相连的蛋白质 微藻 微囊藻素 点样 层析 浓盐酸蒸汽缸 110度加热水解 茚三酮 显色 NMR分析 质谱分析 二维核磁 氨基酸组成分析 酶解测绝对构型 构象分析 NMR分析 1H-NMR和13C-NMR测定 提供氨基酸残基质子和碳的化学位移大致归属 不损失样品量 质谱分析 质谱HR-FAB-MS和FAB-MS 可提供环肽化合物精确的分子量和分子式组成 串联质谱还可提供环肽化合物分子某些重要 的碎片结构以及氨基酸的连接顺序等信息。 只损失μg级的样品量 二维核磁 HMQC,HMBC,1H-1H-COSY, TOSCY, HMQC-TOCSY 结合质谱FAB-MS 对环肽化合物分子的化学位移进行全指定， 并确定氨基酸的连接顺序 氨基酸组成分析 将环肽加入6N盐酸溶液，加热1小时 后用于分析 氨基酸自动分析仪 酶解测绝对构型 L或D-型氨基酸氧化酶酶解 针对有标准品的氨基酸可以用此方法测定，而对于一些没有标准品的非正常氨基酸必须采用衍生化再进行HPLC测定。 构象分析 NOESY和ROESY核磁技术 CD和X-ray 将试剂与待检测的氨基酸反应，反应生成非对映异构体， 再用HPLC测定其保留时间，根据保留时间确定其绝对 构型，这是一个半经验方法，对于有些氨基酸构型确定 会产生错误判断。 海葵毒素 芋螺毒素 海蛇毒素 海葵毒素 海葵属于腔肠动物门、珊瑚纲，它的触手及身体富含 多肽类毒素和蛋白毒素,在受到机械或化学刺激时,便 会释放毒素用于抵御敌害及捕捉食物。 海葵溶细胞素 海葵神经毒素 一类重要的毒素, 分子量在15000－20000， 具有多种生物学活性,如:溶血性、细胞毒性、 心脏刺激活性、使膜去极化、阻断钾离子通道等。 分子量在3000－5000，主要作用于电压门 控钠通道，可用于强心药物的开发。