第六章高效液相色谱法精选.ppt

《仪器分析》课程 Chapter Six High Performance Liquid Chromatography （HPLC） 第六章 高效液相色谱法 厦门大学精品课程 仪器分析(含实验) 高效液相色谱法 HPLC High Performance Liquid Chromatography 王秋泉 博士 厦门大学化学系，教育部现代分析科学重点实验室 Tel: 2181796; Email: qqwang@jingxian.xmu.edu.cn 2001-2004 高效液相色谱法 HPLC High Performance Liquid Chromatography 往复式高压恒流泵 高效液相色谱法 HPLC High Performance Liquid Chromatography 注射泵 高效液相色谱法 HPLC High Performance Liquid Chromatography 梯度洗脱（淋洗） 低压梯度 高压梯度 浓度 时间 高效液相色谱法 HPLC High Performance Liquid Chromatography 正相色谱 反相色谱 Reverse-phase Chromatography 液固色谱 Liquid-Solid Chromatography 液固吸附色谱 Liquid-Solid Chromatography m ad ad m nM X nM X + ? + 以样品中各组分在固定相上的吸附作用不同来进行分离 “相似相溶”原理 异构体的分离 液液分配色谱 Liquid-Liquid Chromatography Ki Stationary phase Mobile phase 固定液易流失 化学键合固定相 化学键合相色谱 Bonded Phase Chromatography 1 功能基团的引入方法 S O C l 2 C l R M g C l R S i O H S i C l S O C l 2 R M g C l S i R 化学键合相色谱 Bonded Phase Chromatography 化学键合相色谱 Bonded Phase Chromatography R -C4, -C8, -C18 -C6H5, -CN, -NH2 -SO3H, -COOH, -NR4＋Cl ---------- 化学键合相色谱 Bonded Phase Chromatography 正相色谱 3 反相色谱 RP-HPLC 4 反相离子对色谱 RP-Ion-Pair HPLC 反相离子对色谱 RP-Ion-Pair HPLC Chromatogram of Mg, Cd and Zn separation 化学键合相色谱 Bonded Phase Chromatography 5 离子交换色谱 化学键合相色谱 Bonded Phase Chromatography 化学键合相色谱 Bonded Phase Chromatography 空间排斥（阻）色谱 Size Exclusion Chromatography 硅胶型、聚苯乙烯型、葡聚糖凝胶型…… 空间排斥（阻）色谱 Size Exclusion Chromatography M.W. tR 空间排斥（阻）色谱 Size Exclusion Chromatography M.W. tR 空间排斥（阻）色谱 Size Exclusion Chromatography M.W. tR 空间排斥（阻）色谱 Size Exclusion Chromatography M.W. tR 空间排斥（阻）色谱 Size Exclusion Chromatography M.W. tR Conditions: Column, Vydac C18, 5-mm, 30 nm (1 mm ID×100 mm) Flow rate, 40 mL/min Mobile phase, A: 0.05% Formic Acid in Water B: 0.05% Formic Acid in Acetonitrile Linear gradient programmed from 20% B to 100% B over 25 min,hold at 100% B for 5 min Sample: mixture of 9 protein standards; 5-mL